[发明专利]一种可保持活性的蛋白质顺序提取方法

摘要

本发明涉及一种可保持蛋白质活性的蛋白质顺序提取方法的建立及其在鹿茸活性蛋白质提取过程中的应用。基于多种溶剂提取可以获得更高提取效率及提取覆盖广度这一原理，选择四种生物相容性良好的提取溶剂；首先应用盐溶液提取水溶性蛋白质，匀浆液经离心后获得上清液作为组分1；然后应用酸性溶液提取残渣中碱性蛋白质，离心后得到上清液作为组分2；继续应用碱性溶液和丁醇水溶液依次对残渣进行提取，分别获得组分3和组分4。本发明的优点为：相对于单一溶剂提取法，本方法可以大大提高提取覆盖广度，同时可保持各提取组分中的蛋白质的活性。此外，由于各溶剂的提取选择性差异，在提取过程中还能实现蛋白质分级处理。

主权项

一种可保持活性的蛋白质顺序提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将动物组织除净残留的血液；2)将组织切片，用生理盐水清洗出去血液残留，在液氮条件下进行研磨，得到粗粉，粒径在0.1‑1mm，向其中加入盐溶液；粗粉1g所需盐溶液4‑10ml；3)超声处理20‑90S，每超声5‑10S、间隔停止5‑10S；然后室温冰上孵育10‑60min；得匀浆液；4)将步骤3）所得匀浆液于10000‑20000r/min条件下离心5‑40min，取上清液，得提取液备用；5)重复步骤3）和步骤4）2‑4次，将所得提取液合并作为提取物A；6)向步骤5）所得残渣中加入酸性溶剂；残渣1g所需酸性溶剂4‑10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液B；7)向步骤6）所得残渣中加入碱性溶剂；残渣1g所需碱性溶剂4‑10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液C；8)向步骤7）所得残渣中加入疏水性溶剂；残渣1g所需疏水性溶剂4‑10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液D；9)将提取液A、B、C、D分别置于超滤离心管中，截留分子量为3000‑10000，在500‑5000r/min范围内离心30min‑6h；10)将过滤得到的浓缩液冷冻干燥，收集后置于‑80℃冰箱保存，获得4种蛋白质产品。