[发明专利]一种缩短植物细胞悬浮培养周期的方法无效
| 申请号： | 201210229723.X | 申请日： | 2012-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN102839190A | 公开（公告）日： | 2012-12-26 |
| 发明（设计）人： | 李兴林;高洁;曹爱佳;韩杨;肖天剑;赵俊;张黎明;满淑丽;高文远 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N1/21;C12N5/10;C12N5/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区塘沽经济*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一种缩短植物细胞悬浮培养周期的方法，本发明属于生物技术领域。首先，选定p53基因的两个保守区分别为正向片段I、II以及对应的反向序列I’和II’；构建I-GU-II’-II-AG-I’的RNAi片段；筛选出其插在pCAMBIA2300植物表达载体的根瘤农杆菌工程菌。然后，以甘草为例，农杆菌介导法依次获得p53转化的愈伤组织及其稳定表达的悬浮细胞。再次，通过看护培养，利用悬浮细胞，筛选生长速度快、效果好的单细胞系愈伤组织以及由此形成的悬浮细胞系。最后，通过培养工艺优化，获得悬浮细胞生长和产物积累的最佳发酵工艺参数。利用本发明方法获得的培养周期短、密度大、成本低、生产效率高的细胞系，为大规模开发和生产药用植物有效成分提供优质种源。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 缩短 植物 细胞 悬浮 培养 周期 方法 | ||
【主权项】：
一种缩短植物细胞悬浮培养周期的方法。其特征是：1.构建p53基因RNAi表达载体工程菌。通过比对Genbank注册的植物p53基因的核苷酸序列，任选其两个保守区核苷酸序列分别为正向片段I、II，并设置其对应的反向序列I’和II’；结合引物设计引入GU-AG类内含子端部碱基，通过PCR构建I-AC-II’-II-CT-I’的RNAi片段；筛选出插在pCAMBIA2300表达载体并能转化植物细胞的工程菌。
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