[发明专利]一种基于微流控芯片的病原体检测方法

摘要

本发明涉及一种基于微流控芯片的病原体检测方法。该方法以集成微磁场的微流控芯片作为反应的容器，磁球作为固相载体，链酶亲和素修饰的量子点（SA-QDs）作为荧光标记物，在微磁场的作用下，在芯片通道中特定部位捕获磁球，形成了微反应区，通过夹心免疫反应捕获病原体，通过生物素与链酶亲和素的相互作用，实现对病原体的荧光免疫定量分析。该检测方法将微流控芯片、磁免疫分析及荧光检测相结合，兼具了微流控芯片的快速、高效和样品用量小，磁免疫分析的高特异性、强可操纵性，及量子点优异的光学性质等优点，是一种多目标的，实时的病原体检测方法。

主权项

一种基于微流控芯片的病原体检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1） 集成微磁场的微流控芯片的制作：用软刻蚀的方法制得微流控芯片的阳模；将两个导磁棒固定于阳模微通道的两侧，导磁棒之间的夹角是0～180o，导磁棒所形成的平面与微芯片的平面之间的夹角是90o；采用原位反应成型法，将液态预聚物倒在固定导磁棒的阳模上，反应固化后，脱模成型，打进样孔和出样孔，然后与盖片键合，即得到集成微磁场的微流控芯片；（2） 修饰有抗特定病原体表面蛋白单抗的磁球制备：用乙基‑[3‑(二甲胺基)丙基]碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺混合物活化磁球表面的羧基，然后加入抗待测病原体表面蛋白的单抗，后将连有抗体的磁球分散在含有叠氮化钠、BSA的PBS缓冲液中，保存备用；（3） 生物素化的抗病原体表面蛋白单抗的制备：采用生物素化的试剂盒在HA单抗上修饰生物素，用脱盐柱进行纯化；（4） 在芯片上进行磁性夹心免疫荧光反应检测病原体：首先用BSA溶液封闭芯片通道，同时在芯片的导磁棒上各放一块永磁铁，然后依次向通道中注入修饰有抗特定病原体表面蛋白单抗的磁球、特定病原体、生物素化的抗该病原体表面蛋白单抗、链酶亲和素修饰的量子点，每步反应后都用PBS缓冲液冲洗通道，洗掉未反应的药品，最后通过荧光显微镜与光纤光谱仪进行荧光检测。