[发明专利]快速获得葡萄松散型愈伤组织及其长期继代保持的方法

摘要

本发明提供快速获得葡萄松散型愈伤组织及其长期继代保持的方法，依次通过制备葡萄无菌株系、启动培养、制备葡萄松散型愈伤组织来获得葡萄松散型愈伤组织，并将获得的葡萄松散型愈伤组织接于第一种培养基中继代保持至少2代后，转接到第二种培养基中继代保持1代，反复交替即可长期继代保持葡萄松散型愈伤组织，且继代保持时的该第一种培养基、第二种培养基均置于培养室中进行。本发明的优点在于：所获得的葡萄愈伤组织具有高诱导效率及高质量的特点，同时可长期继代保持获得的葡萄松散型愈伤组织，从而为葡萄细胞培养生产次生代谢产物和生物技术等研究奠定了良好的基础。

主权项

一种快速获得葡萄松散型愈伤组织的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：（1）葡萄无菌株系的获得：选取经预处理后的当年生无病葡萄枝条的带节茎段，之后将所选取的带节茎段接种到附加0.1mg/L NAA的1/2MS培养基上诱导产生葡萄无菌株系；其中预处理包含清洗、风干表面水分，并杀菌消毒；（2）启动培养：取步骤（1）所获得的葡萄无菌株系的小苗，切取0.5cm茎段或切取0.5cm×0.5cm见方大小的叶片作为外植体，接着将该外植体接种至诱导愈伤组织的培养基中，并将该培养置基于培养室中培养，7天后可见愈伤组织形成，25~30天后长成初代愈伤组织；（3）制备葡萄松散型愈伤组织：将步骤（2）培养得到的初代愈伤组织转接到继代增殖培养基中，并将该继代增殖培养基置于培养室中进行继代增殖培养，以获得葡萄松散型愈伤组织；其中，步骤（2）与步骤（3）中所述培养室中的条件均为：温度设置23~25℃，光照强度1500~2000lx，每天光照12h。