[发明专利]一种从南极磷虾中提取生物素的方法及高效薄层扫描分析方法

摘要

本发明公开了一种从南极磷虾中提取生物素的方法及高效薄层扫描分析方法：用二甲基甲酰胺从南极磷虾中提取生物素，经离心除杂和浓缩制备样品液，同生物素标准品液采用外标一点法，在涂有硅胶GF₂₅₄高效薄层板上展开，展开剂为按比例配制的二氯甲烷、异丙醇、甲醇和冰乙酸的混合液。展完后的展板，用染色液喷雾染色。将板放进通风橱5分钟后，喷上10%的石蜡氯仿溶液。以530nm吸收波长进行薄层扫描，计算得到南极磷虾中的生物素含量。方法简单、准确、快速、可靠、稳定。

主权项

一种检测生物素的高效薄层扫描分析方法，其特征在于：步骤如下：(1)取待检测样品液4μL，点在涂有硅胶GF254高效薄层板上，以体积比二氯甲烷：异丙醇：甲醇：冰乙酸＝1～3：1～3：2～3：0.01～0.15作为展开剂，在展开缸内展开，展距为6cm，并采用外标一点法点1μL生物素标准品溶液，同时展开，展开的时间为40分钟，展开的距离为6cm，然后晾干；(2)将2,4‑二甲氨基肉桂醛、浓硫酸和无水乙醇混合，配成染色液，其中2,4‑二甲氨基肉桂醛终浓度为0.1～0.2％，硫酸终浓度为10～20％；展完后晾干的展板，用染色液喷雾染色，将板放进通风橱5分钟后，喷上10％的石蜡氯仿溶液；冷却后放入Camag薄层扫描仪‑Ⅲ扫描，扫描波长为530nm，通过检测样品和标准品对紫外线的吸光度并计算得到生物素的含量；步骤(1)中，生物素标准品溶液的浓度分别为0.19mg/mL、0.3mg/mL、0.66mg/mL、1.28mg/mL和3.31mg/mL；所述样品液是通过以下方法制备得到的：(1)取1公斤冷冻的南极磷虾，在40～60℃烘干，然后加入3～9升的氯仿，在常温下搅拌提取1～3次，每次时间为30～60分钟，过滤得处理虾粉；(2)将上述得到的处理虾粉按虾粉：二甲基甲酰胺＝1g：25～40mL的比例加入二甲基甲酰胺，在75～95℃水浴上搅拌提取1～2小时，得提取液；(3)上述得到的提取液在10,000rpm下离心10分钟，取上清液，向上清液中加入等体积量的乙醇，50～65℃下旋转蒸发浓缩，得浓缩液，即为含有生物素的样品液。