[发明专利]一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺

摘要

本发明公开了一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺，该制备工艺包括产品粗提纯、溶液配制、亲和柱层析、超滤脱盐、无菌过滤、冻干、包装等工序，所得到的产品纯度高达95%以上，效价增加70单位/mg以上，比活达到600单位/mg蛋白以上，可以做为注射剂的原料药进行应用。

主权项

一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺，其特征在于：步骤如下：（1）粗提纯：①取胰脏粉或胰脏，加10～30倍量纯化水溶解提取，搅拌均匀后加入氯化钙至浓度为5～8%，调整pH为6.0～8.0，冷冻静置沉淀，离心收集沉淀；②将上述沉淀加入到事先配制好的2～4%的草酸盐溶液中，充分搅拌25～35分钟溶解，静置沉淀进行粗提纯，虹吸上清液得粗品液；（2）溶液配制：配制浓度为20～40%的无机盐平衡液，调整pH为4.0；配制浓度为20～40%的无机盐洗脱液，调整pH为6.0；（3）亲和柱层析：①平衡：将装有HS‑Sepharose亲和层析填料的层析柱，用上述配制的pH4.0、浓度20～40%的无机盐平衡液平衡，直至进出层析柱的溶液pH值与电导值相同时平衡完毕；②进样：调整上述制备的含胰激肽原酶的粗品液的pH值与无机盐平衡液一致，粗品液电导值等于平衡液电导值，根据每升填料最大亲和量3000万单位进行上样；③洗涤：用上述配制的pH4.0、浓度20～40%的无机盐平衡液冲洗一个柱体积；④洗脱：用上述配制的pH6.0、浓度20～40%的无机盐洗脱液冲洗柱子，同时用754分光光度计跟踪检测流出液在254nm处的吸收值，收集洗脱液，得收集液；（4）超滤脱盐：将上述收集液加注射用水超滤脱盐浓缩，当溶液电导值小于1000μs/cm时，停止加注射用水，继续浓缩，得浓缩液；（5）除菌：上述浓缩液用微孔滤膜进行除菌过滤，得无菌滤液；（6）冻干：加入辅料进行冻干，即得胰激肽原酶。