[发明专利]一种重组人表皮生长因子工程菌的构建和筛选方法无效
| 申请号： | 201210272216.4 | 申请日： | 2012-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN102978231A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 郑春阳;王磊;王巍;徐彬 | 申请（专利权）人： | 天津强微特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300384 天津市南开*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种重组人表皮生长因子(hEGF)工程菌的构建和筛选方法。主要步骤为：一、由PCR技术获得卡那霉素抗性基因，由化学合成方式获得大肠杆菌cspA基因功能元件；二、对编码SUMO蛋白和hEGF的基因序列，分别进行优化，然后由化学合成获得大量表达的融合蛋白基因序列OPT-SUMO-hEGF；三、将前两步所得片段连入pET21质粒，得到pET-Kan-cspA-SE质粒；四、以上述质粒为模板，构建转座体；五、将转座体转入大肠杆菌Origami 2(DE3)；六、筛选出融合蛋白SUMO-hEGF表达量高的菌株。本发明得到的菌株基因组稳定，表达的hEGF可溶率高，适合大规模工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 表皮 生长因子 工程 构建 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种重组人表皮生长因子(hEGF)工程菌的构建和筛选方法，其特征在于重组hEGF工程菌的构建和筛选方法按以下步骤进行：一、通过PCR技术获得卡那霉素抗性基因，通过化学合成方式获得大肠杆菌cspA基因功能元件；二、对编码SUMO蛋白的基因和编码hEGF的基因序列，按照大肠杆菌的密码子偏好性，进行密码子优化，然后进行化学合成获得适合在大肠杆菌中大量表达的序列OPT‑SUMO‑hEGF；三、将第一步和第二步所得的片段连入pET21质粒中，得到pET‑Kan‑cspA‑SE质粒；四、以pET‑Kan‑cspA‑SE质粒为模板，构建转座体；五、将转座体转入大肠杆菌Origami 2(DE3)；六、筛选出融合蛋白SUMO‑hEGF表达量高的菌株。
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