[发明专利]采用芥菜型油菜基因ANS和埃塞俄比亚芥BAN共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法有效
| 申请号： | 201210295300.8 | 申请日： | 2012-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN102827861A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 刘丽莉;严明理;向建华;孙婵;尹小明 | 申请（专利权）人： | 湖南科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 张家界市慧诚商标专利事务所 43209 | 代理人： | 高红旺 |
| 地址： | 411201 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种采用芥菜型油菜基因ANS和埃塞俄比亚芥基因BAN共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法。本发明从芥菜型油菜种子的cDNA中克隆花色素合成酶ANS基因和埃塞俄比亚芥种子的cDNA克隆花色素还原酶BAN基因，构建含ANS和BAN基因的原核表达载体pET-ANS-BAN，将ANS和BAN基因同时导入BL21大肠杆菌菌株。转化菌株在的LB液体培养基中，28-38℃，150-250rpm(转/分钟)培养6-12小时候后，再转移到葡萄皮提取物(0.2-0.8g/L)的LB液体培养基中，28-38℃，150-250rpm震荡培养36-54小时后，离心收集菌体，采用DMACA-HCl法测定大肠杆菌所含的原花色素的量。本发明获得的转基因大肠杆菌中原花色素的含量显著提高，最高达到非转化对照菌株的24.2倍。 | ||
| 搜索关键词： | 采用 芥菜 油菜 基因 ans 埃塞俄比亚 ban 转化 提高 大肠杆菌 中原 花色素 含量 方法 | ||
【主权项】：
一种采用芥菜型油菜基因ANS 和埃塞俄比亚芥BAN 共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）从芥菜型油菜种子的cDNA中克隆花色素合成酶ANS基因和埃塞俄比亚芥种子的 cDNA中克隆花色素还原酶BAN基因；（2）把ANS 和BAN 基因可操作性地连接于表达调控序列，形成含ANS 和BAN基因的原核表达载体;（3）将ANS和BAN基因同时导入BL21大肠杆菌，转化的单菌落在0.5‑1.0 mL的LB液体培养基中，28‑38℃，150‑250rpm(转/分钟)培养6‑12小时候后，再在含黑色葡萄皮提取物的LB液体培养基中，28‑38℃，150‑250rpm震荡培养36‑54小时后，常温下，10000‑12000g离心10‑20min收集菌体；（4）采用DMACA‑HCl法测定大肠杆菌所含原花色素的量，筛选获得原花色素含量提高的大肠杆菌菌株。
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