[发明专利]一种柑橘溃疡病菌拮抗细菌抑菌能力的测定方法

摘要

本发明公开了一种柑橘溃疡病菌拮抗细菌抑菌能力的测定方法，该方法将拮抗细菌新鲜菌液接种到NB液体培养基中，取上清液经微孔滤膜过滤，无菌滤纸片浸润其中；将柑橘溃疡病菌配制菌悬液，与NA培养基混匀后制平板；无菌滤纸片放入平板中央，培养48h后测定抑菌圈直径。本发明系采用拮抗细菌的无菌滤液来测定其对柑橘溃疡病菌的抑制能力，从而为柑橘溃疡病菌生防细菌的筛选提供方法。本发明方法能有效地测定出分离获得的拮抗细菌对柑橘溃疡病菌的抑制能力，具有操作简便、试验稳定性好、抑菌圈宽度测定准确等优点。使用本发明方法能筛选出对柑橘溃疡病有潜在应用价值的拮抗细菌。

主权项

一种柑橘溃疡病菌拮抗细菌抑菌能力的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(a) 将1.0 × 106 CFU/ mL的拮抗细菌新鲜菌液1 mL接种到盛有50 mL 的NB液体培养基的三角瓶中，28℃下180 r/min振荡培养72 h后，经12,000 r/min离心20 min，取上清液，经孔径为0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌即得无菌滤液；(b) 将直径10 mm的无菌滤纸片放入步骤(a)制得的无菌滤液中浸润20min；(c) 将柑橘溃疡病菌配制为2.0 × 108 CFU/ mL的菌悬液，取2 mL菌悬液与冷却至50℃的200 mL NA培养基混匀，倒入直径90mm的培养皿制平板，每个平板20 mL；(d) 往步骤(c)制得的含柑橘溃疡病菌的平板中央放入步骤(b)制得的浸润拮抗细菌无菌滤液的滤纸片，28℃培养48 h后，观察记录拮抗细菌对柑橘溃疡病菌的抑菌能力，测定抑菌圈直径。