[发明专利]一种检测火鹤的SERK基因表达状况的试剂盒及其方法

摘要

一种检测火鹤的SERK基因表达状况的试剂盒及其方法，属于植物分子生物学领域。以火鹤盆栽品种‘阿拉巴玛’成熟植株刚展开幼嫩叶片为外植体，进行火鹤胚性愈伤组织的诱导，并对两个诱导阶段获得的非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织进行细胞学观察；通过克隆得到火鹤体胚SERK基因的cDNA基因全长序列设计特异性较强的引物，并采用实时荧光定量PCR技术对火鹤体细胞胚诱导与发育阶段的SERK基因转录水平的表达量变化进行研究分析，得到成本较低，特异性较高的检测火鹤的SERK基因表达状况的试剂盒及其方法。

主权项

一种检测火鹤的SERK基因表达状况的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)愈伤组织的诱导与继代培养、发育培养：取刚展开的幼嫩叶片为外植体材料，经过0.1％升汞3min表面灭菌后，用无菌水冲洗4‑5遍，将叶片沿中脉切成1×1cm叶片切块平铺接种于1/2MS+0.5mg/L6‑BA+0.5mg/L2，4‑D培养基中，培养基Ph值为5.8，于25±2℃黑暗条件下诱导愈伤组织，愈伤诱导率达到了85％以上，两个月后待粒状愈伤组织连成片后，将愈伤组织切割置于1/2MS+1.0mg/L6‑BA+0.1mg/L KT+0.5mg/L NAA上继代培养，继代培养获得的新愈伤组织切割置于1/2MS+0.5mg/L6‑BA培养基上进行发育培养，将启动培养获得的愈伤组织切成小块，转入不加2，4‑D的培养基上进行继代培养20～30d；(2)以火鹤胚性愈伤组织为材料，用改良的CTAB法提取总RNA；(3)设计一对引物进行火鹤体胚发生过中SERK基因表达实时荧光定量试验，长度为129bp；YGPCR forward1：CAGACGGTTC ACTTGTGGCAGYGPCR reverse1：ATCCACGAAG GCGAAGGAGG TT以18S rRNA基因作为内参，采用实时荧光定量PCR分析火鹤体胚发生发育过程中SERK基因表达的变化规律，18SrRNA基因为内参基因，片段长度171bp，18S rRNA F：CCTGAGAAACGGCTACCACAT18S rRNA R：CACCAGACTTGCCCTCCA。