[发明专利]一种高效快速分离人间充质干细胞的方法

摘要

本发明公布了一种快速高效分离扩增脐带间充质干细胞的一种生物技术方法。本方法利用足月剖宫产的胎儿脐带组织，利用混合酶消化法联合组织贴块法，短时间内获得大量的间充质干细胞。此种方法有效减少了酶消化时间、最大程度上减少了细胞数量的丢失，并且改善了长时间酶消化过程对间充质干细胞生物活性的影响。本方法同时优化了体外扩增条件，扩增后的细胞具有间充质干细胞的生物学特性和较高的增殖能力。本发明创造优化了一种高效快速的脐带间充质干细胞的分离、提纯、扩增的生物技术，将为干细胞科研和临床应用提供足量的种子细胞来源。

主权项

一种脐带胶质间充质干细胞的制备方法，其主要制备工艺包括：利用35岁以下健康足月妊娠产妇剖宫产后的新鲜脐带组织，0.9％无菌生理盐水中浸泡，5小时内，冰块上运输至无菌操作室。用0.9％无菌生理盐水清洗脐带组织上的血液和血凝块，利用无菌缝合线将三通管固定在脐静脉和脐动脉内，0.9％生理盐水大量冲洗血管腔以完全去除血液，本操作可最大程度的发挥消化酶的活性，提高间充质干细胞的获得率。将脐带组织剪成5mm3左右的小块，Librase Blenzyme37摄氏度滚动摇床上消化1小时，收集细胞悬液，用含血清的培养基终止消化酶的作用，100目过滤网过滤后收集细胞用0.9％无菌盐水清洗细胞2次，用含体积分数10％胎牛血清或体积分数20％人AB型血清的细胞完全培养基重悬细胞，37度，5％CO2培养箱中培养；另外消化后剩余的组织块用0.9％无菌盐水清洗两次后，放入完全培养基中，37度，5％CO2培养箱中培养。本发明优化了干细胞提取的操作过程，无干细胞的数量损失。24到48小时后，更换培养基。以后隔日换液，细胞增殖到80％融合时，传代培养。细胞可新鲜使用或冻存。