[发明专利]一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法

摘要

本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法，属于化学成分检测的技术领域。本方法按照如下步骤进行检测：样品前处理；标准品前处理；葡萄糖标准曲线制备；半乳糖标准曲线制备；样品及标准品水解；色谱检测葡萄糖、半乳糖含量；以葡萄糖、半乳糖标准曲线对水解产品进行定性，以酵母β-葡聚糖标准品水解产物进行定量，即可定量得知被检测的乳制品样品中酵母β-葡聚糖含量。

主权项

1.一种乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法，包括下列步骤：a)样品前处理i)称样在50mL高速离心管中称取待测液体样品25.0000x N g，其中固体样品5.0000x Ng加超纯水至25.0000x N g，充分溶解；ii)沉淀加入5x N mL 20%乙酸锌溶液和5x N mL 10%亚铁氰化钾溶液，充分振荡混合后于5500g离心10min，去掉上清液；iii)水洗沉淀物加15x N mL超纯水，玻璃棒搅匀，用10x N ml超纯水冲洗玻璃棒，振荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；iv)醇洗沉淀物加15x N mL 75%乙醇，玻璃棒搅匀，用10x N mL 75%乙醇冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；v)二次水洗沉淀物再加15mL x N超纯水，玻璃棒搅匀，用10mL x N超纯水冲洗玻璃棒，震荡混合均匀后，于5500g离心10min，去掉上清液；b)标准品前处理i)称样在250mL SCHOTT瓶中称入0.0105g（称准至0.0002g）Sigma G5011标准品；ii)标准品预溶加入50mL超纯水预溶；c)葡萄糖标准曲线制备吸取葡萄糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到葡萄糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程；d)半乳糖标准曲线制备吸取半乳糖标液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超纯水定容到刻度，得到半乳糖为20、60、100mg/L的混合标样。在色谱条件下准确进样20uL，绘制色谱峰面积和标准物质量浓度之间的标准曲线，得出回归方程；e)样品及标准品水解i)样品加酸将a)中的步骤v)得到的沉淀物转入250mL SCHOTT瓶中，加入12x N mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀；ii)标准品加酸在b)中的步骤ii)得到的标准品溶液中，加入12mL盐酸（37%），加超纯水至150mL，振荡混匀；iii)水解将SCHOTT瓶放入高压灭菌锅121℃处理60min。水解完成后马上冷却，用40%氢氧化钠，将溶液调pH到6-7，然后定容至250mL；f)在色谱条件下检测葡萄糖、半乳糖含量；g)结果计算结果计算采用下式：其中：W：称量的牛奶样品，g；V：样品水解后定容体积，mL；c_葡萄糖：样品水解定容后由HPLC测定得到的葡萄糖含量，g/mL；c_半乳糖：样品水解定容后由HPLC测定得到的半乳糖含量，g/mL；0.9：葡萄糖换算为葡聚糖的换算因子；F：葡聚糖水解校正因子；C_{葡萄糖-标}：标准品水解定容后由HPLC测定得到的葡萄糖含量，g/mL；V_标：标准品水解后定容体积，mL；W_标：标准品称样质量，g；其中，所述N大于0。