[发明专利]一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法

摘要

本发明涉及一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，具体步骤如下：1、制备重组表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα种子；2、将该工程菌种子培养，制备发酵罐用种子液；3、将种子液接入发酵培养基中，通气搅拌培养；4、碳源消耗完补加补料培养基，加入IPTG，诱导表达目的蛋白；5、取发酵液，离心，收集菌体，PBS洗涤后PBS重悬，超声破碎，离心，收集沉淀，变性缓冲液溶解沉淀，离心，收集上清液，加入复性缓冲液，静置后再离心，取上清液，即得含有鸡基因工程鸡干扰素α的溶液。本品具有广谱抗病毒性，可以调节B、T淋巴细胞的功能，激活机体免疫系统，提高机体免疫力，并可强化疫苗免疫效果，减少应激反应等生物学功能。

主权项

一种高效鸡基因工程鸡干扰素α的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1）重组表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα种子制备：将重组表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα按1%的比例接种菌液于含Amp的LB液体培养基中，振荡培养；将培养液接种至含Amp的LB平板，划线培养，挑取单菌LB中摇瓶培养，当OD600nm＝0.5，按250ul/750ul的比例加入50%的甘油，保存；2）工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα发酵种子液制备：将保存的工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα种子按0.05‑0.1%体积的量接种于2×YT培养液中培养，作为发酵罐用种子液；3）工程菌E.coli BL21(DE3)/pET22b(+)/ChIFNα发酵生产：菌体培养阶段：发酵培养基高温灭菌后，每升培养基加入100mg的Amp，按5‑10%体积的量接入种子液，通气搅拌培养，培养过程调节pH7.2；碳源饲喂阶段：碳源耗完，流加补料培养基，溶氧量维持在30％，培养过程调节pH7.2；诱导表达阶段：继续连续流加补料培养基；加入IPTG，在IPTG终浓度0.5mM条件下诱导表达目的蛋白，培养过程中调节pH7.2，溶氧量维持在30％，诱导4h停罐；4）重组鸡α干扰素的纯化：取上述发酵液，5000rpm离心10min收集菌体，经PBS缓冲液洗涤后PBS缓冲液重悬，超声30min，10000rpm，4℃，离心10min收集沉淀，PBS缓冲液洗涤沉淀，然后用变性缓冲液溶解沉淀，10000rpm，4℃，离心10min，收集上清液，将上清液缓慢加入复性缓冲液中，4℃静置48h，10000rpm，4℃，离心20min，收集上清液，即得到含有高效鸡基因工程鸡干扰素α的溶液。