[发明专利]一种鸭黄病毒检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种鸭黄病毒检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括：i、RNA提取试剂，ii、反转录PCR试剂，包括反转录反应试剂和PCR反应试剂，iii、鸭黄病毒鸭胚尿囊毒阳性对照和阴性样品。所述检测方法包括：第一步，从待测鸭胚尿囊液样品中提取总RNA；第二步，以所述第一步提取的总RNA为模板，进行反转录反应；第三步，以所述反转录产物为模板，进行PCR扩增；第四步，取所述第三步PCR反应液进行琼脂糖凝胶电泳，EB染色后判断结果。本发明可特异地检测到鸭黄病毒的核酸，最低检测量为3.2ng/μl；建立了一种快速、特异、准确的鸭黄病毒检测方法，为今后对该病的流行监测和防控提供了检测工具。

主权项

一种鸭黄病毒检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：i、RNA提取试剂，包括Trizol试剂、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水；ii、反转录PCR试剂，包括反转录反应试剂和PCR反应试剂；所述反转录反应试剂包括0.2μg/μl的Random primer、DEPC水、5×buffer、10mM的dNTP、20u/μl的Rnase抑制剂、200u/μl的M‑MuLV以及样品总RNA；所述PCR反应试剂包括20u/μl的ExTaq酶、10mM的鸭黄病毒通用上游引物DFV‑F、10mM的鸭黄病毒通用下游引物DFV‑R，2.5mM的dNTP、10×buffer；所述鸭黄病毒通用上游引物DFV‑F为5′‑AATTCGACACATGAGATGTAC‑3′；所述鸭黄病毒通用下游引物DFV‑R为5′‑CCAAGCCACATGTACCA‑3′；iii、鸭黄病毒鸭胚尿囊毒阳性对照和阴性样品。