[发明专利]利用基因工程提高玉米直链淀粉含量的双元载体构建方法

摘要

本发明公开了一种利用基因工程提高玉米直链淀粉含量的双元载体构建方法，设计引物扩增扩增第九外显子及内含子部分序列(315bp)和第九外显子反义序列(155bp)，同时扩增sbe2b启动子，将含有正反外显子及内含子的整体DNA片段连同启动子同时连入pCAMBIA3301载体的多克隆位点中；然后，将ss1启动子片段及ss1基因cDNA片段替换MCS中含sbe2b RNAi三片段的pCAMBIA3301载体的35S及GUS片段，因此该表达载体同时含有sbe2b启动子控制的反义sbe2b cDNA片段和ss1启动子控制的ss1全长cDNA片段。本发明提供的表达载体中含有的sbe2b RNAi片段能够降低SBEIIb酶的活性，使淀粉合成时分支数降低，从而提高直链淀粉的相对含量；同时该载体中含有的ss1基因过表达片段能够提高玉米胚乳SSI酶的活性，从而提高总淀粉含量。

主权项

一种利用基因工程提高玉米直链淀粉含量的双元载体构建方法，其特征在于，该构建方法包括：sbe2b RNAi载体的构建：玉米sbe2b基因在胚乳中特异表达，选用sbe2b启动子驱动干涉片段的表达，通过对sbe2b基因进行在线同源比对，发现其第九外显子特异性较高，因此我们设计引物扩增第九外显子及内含子部分序列315bp和第九外显子反义序列155bp，同时扩增sbe2b启动子，将上述三片段同时连入pCAMBIA3301载体的多克隆位点MCS中；ss1过表达载体的构建：利用ss1基因启动子驱动玉米ss1基因的表达，将ss1启动子片段及ss1基因cDNA片段替换MCS中含sbe2b RNAi三片段的pCAMBIA3301载体的35S及GUS片段，因此该表达载体同时含有sbe2b启动子控制的反义sbe2b cDNA片段和ss1启动子控制的ss1全长cDNA片段。