[发明专利]快速制备黄单胞菌电转化感受态细胞的方法及其应用无效
| 申请号： | 201210379735.0 | 申请日： | 2012-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN102876610A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 梁如冰;马辰;刘建华 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/63;C12R1/64 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 杨元焱 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种快速制备黄单胞菌电转化感受态细胞的方法及其应用。本发明利用蔗糖溶液在室温下经重悬-离心方法处理过夜培养细胞，来制备黄单胞菌高效电转化感受态细胞，全程仅需十五分钟。该方法克服了传统电转化方法的耗时较长，效率偏低，操作复杂等缺点。与现有转化方法相比，本发明方法的转化效率提高了约100倍。本方法可用于可复制质粒与不可复制质粒的高效快速转化。在最佳条件下，可复制质粒的转化效率可达109CFU/μg DNA，不可复制质粒的转化效率达150CFU/μg DNA。因此，本方法简化了黄单胞菌电转化操作，推进了基因敲除的进程。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 制备 黄单胞菌电 转化 感受态 细胞 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种快速制备黄单胞菌电转化感受态细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：a、将黄单胞菌8004菌种在LB固体平板上划线培养，28℃培养48小时；b、挑取单克隆接种于10ml LB液体培养基中，置于28℃摇床上220rpm/min过夜培养；c、等分过夜培养物到四个5ml离心管中，室温下以8000rpm/min离心5min，收集细胞；d、用1ml的250mM蔗糖溶液重悬菌体，室温下以12000rpm/min离心2mmin，重复上述重悬‑离心步骤三次，收集细胞；e、每管细胞中加入25μl的250mM蔗糖溶液，重悬并合并四管细胞后，分装50μl/管，‑80℃冻存，得到细胞终浓度为109‑1010℃FU/ml的黄单胞菌电转化感受态细胞。
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