[发明专利]一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法，包括以下步骤：步骤1）制备反应液；步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。本发明通过配制反应液，设计引物序列，能快速、准确的检测肠产毒性大肠杆菌，并及时采取相应的措施，减少了疾病的发生率。

主权项

一种高特异高敏感检测肠聚集性大肠杆菌的方法,其特征在于，包括以下步骤：步骤1）制备反应液反应液组成及含量为8u/ul Bst核酸聚合酶                            8u10X耐热聚合酶反应缓冲液                 1X，MgSO4 2mM4M 甜菜碱                                    1M10mM d‑NTP混合液                             400μM内引物   EAEC‑FIP                                   40umol   EAEC‑BIP                                   40umol外引物   EAEC‑F3                                    5umol   EAEC‑B3                                    5umol标本核酸                                      20ng添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul；步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30‑60min，浑浊为阳性;步骤3）提取临床分离肠聚集性大肠杆菌，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。