[发明专利]提高上面发酵小麦啤酒中4-乙烯基愈创木酚含量的方法

摘要

本发明公开了一种提高上面发酵小麦啤酒中4-乙烯基愈创木酚含量的方法，将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的PADC基因进行克隆，保留其遗传特性，使其在大肠杆菌中表达，并将该PADC基因转化至上面发酵酵母菌株W303-1A中，以构建一株上面发酵啤酒酵母W303+padc。本方法可显著提高上面发酵小麦啤酒中的4-乙烯基愈创木酚含量，突出小麦啤酒典型的丁香花味。

主权项

一种提高上面发酵小麦啤酒中4‑乙烯基愈创木酚含量的方法，其特征在于，步骤如下：（1）从枯草芽孢杆菌中通过PCR扩增PADC基因，PADC基因核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，PCR扩增引物序列如下：上游引物：F‑padc5’‑GCG TCTAGA ATGGAAAACTTTATCG‑3’下游引物：R‑padc5’‑GCG AAGCTT TTATAATCTTCCCGC‑3’；（2）将步骤（1）制得的PADC基因经纯化后，经内切酶XbaI和内切酶HindIII双酶切后与同样经内切酶XbaI和内切酶HindIII双酶切的质粒YEp352连接，制得重组质粒YPADC，将重组质粒YPADC转化至上面发酵酵母W303‑1A，获得上面发酵重组酵母菌株W303+padc；（3）利用11°P麦汁对步骤（2）制得的上面发酵重组酵母菌株W303+padc进行扩大培养，培养条件为：25～28℃摇床，220～240r/min，获得上面发酵酵母W303+padc；（4）将步骤（3）制得的上面发酵酵母W303+padc接种于11°P麦汁中，在温度为16～18℃进行发酵培养至糖度为4°P时，密封发酵容器保压至双乙酰含量低于0.1mg/L，降温至0～2℃，保存5～8天，制得4‑乙烯基愈创木酚含量为1.6～1.8mg/L的啤酒。