[发明专利]一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法

摘要

一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法，它涉及蒙古柳FOX hunting农杆菌cDNA文库的构建方法。本发明提供了一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法。构建方法如下：提取蒙古柳的总RNA，反转录成总cDNA；连接到pGEM-T载体上，转化JM109感受态细胞中，构建了pGEM-cDNA；将pGEM-cDNA和pBI121载体，双酶切后连接，得到pBI121::cDNA；再转化至JM109感受态细胞中，构建出pBI121::cDNA克隆文库；电击转化根癌农杆菌EHA105菌株中，即完成。本发明对沙化土地资源的高效利用、生态环境的建设有一定作用。

主权项

一种FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建方法，其特征在于FOX hunting蒙古柳农杆菌cDNA文库的构建是按照以下步骤进行的：一、采用异硫氰酸胍法提取蒙古柳的总RNA，然后采用试剂盒对提取的蒙古柳总RNA反转录成总cDNA；二、将步骤一反转录的总cDNA连接到pGEM‑T载体上，构建出pGEM‑cDNA，转化大肠杆菌JM109感受态细胞中，构建了pGEM‑cDNA在大肠杆菌JM109中的文库；三、将步骤二得到的pGEM‑cDNA和pBI121载体，采用AsiSI和AscI酶分别进行双酶切，然后将酶切后的目的片段与酶切后的pBI121载体进行连接，得到植物二元表达载体pBI121::cDNA；四、将步骤三得到的植物二元表达载体pBI121::cDNA，转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中，构建出JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库，提取JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库的DNA；五、将步骤四得到的JM109菌株的pBI121::cDNA克隆文库的DNA通过电击转化导入根癌农杆菌EHA105菌株中，即完成蒙古柳FOX hunting农杆菌cDNA文库的构建。