[发明专利]一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法

摘要

本发明属生物工程技术领域，具体涉及一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法。主要包括菌种的组织分离，培养基的组成，发酵条件，硒元素的转化，菌丝体的收集，粉碎，水浸提，醇提后冷冻干燥得到富硒金耳胞内粗多糖粉；另外将发酵液浓缩，将浓缩液醇提后冷冻干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉。每克粗多糖粉中有机硒含量达10微克/克以上。富硒金耳粗多糖粉有增强免疫力，抗疲劳，降血糖等保健生理活性。可应用于制备具有相关功效的保健品。

主权项

一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法，其特征是将金耳固体斜面菌种活化后接入摇瓶种子培养基中培养，分散菌丝体，将培养好的种子液接入摇瓶发酵液体培养基培养。在发酵液体培养基中加入一定浓度无机硒，使金耳菌丝体中积累高浓度的有机硒，同时发酵液有效成分中也有一定浓度的硒元素。发酵结束后，收集菌丝体，匀浆，热水浸提，浸提液浓缩后醇析，冷冻干燥得到富硒金耳胞内粗多糖粉；另外将发酵液浓缩，将浓缩液醇析后冷冻干燥得到富硒金耳胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒金耳粗多糖粉； 具体步骤为： (1)菌种培养 出发菌种为本实验室金耳斜面保藏菌种； ①摇瓶种子培养 摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0； 培养方法：从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于25℃，120r/min，振荡培养7d； ②摇瓶发酵培养 发酵培养基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氢钾0.2g/100mL、硫酸镁0.05g/100mL、亚硒酸钠若干； 培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入摇瓶发酵培养基中25℃，120r/min，振荡培养7d； (2)富硒粗多糖的提取：离心分离收集发酵液和菌丝体； ①胞内粗多糖的提取：将湿菌丝体匀浆，80℃热水浸提，加水量为5倍体积湿菌丝体，总提取时间为12h，提取2次，合并提取液，浓缩后加入4倍体积95％乙醇在4℃醇析12h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒金耳胞内粗多糖粉； ②胞外粗多糖提取：将发酵液浓缩后调PH值为5.5，添加4倍体积发酵液的95％乙醇，4℃醇析17h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒金耳胞外粗多糖粉； (3)产品的获得：将富硒金耳胞内粗多糖粉与茶树菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒金耳粗多糖粉。