[发明专利]饲用果胶酶DNS检测法

摘要

本发明设计酶活检测领域，具体地涉及饲用果胶酶DNS检测法。根据本发明的饲用果胶酶DNS检测法，其酶活定义为：1g酶粉或1mL酶液在pH3.5、37℃下，每分钟从浓度为2.25mg/mL的底物（Sigma P9135）溶液中分解释放1μmol还原物质（表述为半乳糖醛酸）所需要的酶量为一个酶活单位U。本发明的检测果胶酶活性的DNS检测法确定了反应体系：包括反应温度、反应pH值、底物浓度、酶液与底物比例、反应总体系等各种参数；确保该方法操作简便，且重复性好。

主权项

饲用果胶酶DNS检测法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）吸取果胶粉溶液，加入DNS试剂并振荡，在37℃水浴锅中保温30min，再加入稀释的酶液，混匀，沸水浴煮沸，测定在540nm处测定吸光度AB；（2）吸取果胶粉溶液，加入与步骤（1）稀释同样倍数的酶液混匀，在37℃水浴中精确保温30min，加入DNS试剂，混匀，沸水浴煮沸，测定在540nm处测定吸光度AS；（3）酶活计算酶活X=[(AS‑AB)×K+CO]×1000×Df/30/m/MX：酶样中果胶酶活力，U/mL；AS：待测酶反应液的吸光度；AB：待测酶空白样的吸光度；K：标准曲线的斜率；CO：标准曲线的截距；Df：待测酶样品的稀释倍数；M：半乳糖醛酸的分子量，212.15g/mol；m：待测果胶酶取样量，其中，对于步骤（1）和步骤（2），果胶粉溶液的pH为3.5；果胶粉溶液与酶液的体积比为3：1；在果胶粉溶液与酶液的混合液中，果胶粉的浓度为2.25mg/mL。