[发明专利]一种生产口服型新型猪圆环病毒疫苗的方法

摘要

本发明提供一种生产口服型新型猪圆环病毒疫苗的方法，将猪2型圆环病毒抗原蛋白的编码基因置于衣藻叶绿体特异表达的启动子和终止子之间，构建抗原蛋白基因的衣藻叶绿体表达盒；抗原蛋白基因表达盒与筛选抗性标记基因表达盒相连并分别连接上衣藻叶绿体基因组中的同源片段，构建成衣藻叶绿体特异表达载体；通过基因枪轰击转化衣藻细胞并筛选具有抗性的绿色单藻落；获得外源基因在衣藻叶绿体中完全同质化的藻落；筛选出外源抗原蛋白基因在衣藻叶绿体中高效稳定表达的衣藻转化子，用作猪圆环病毒病口服疫苗。本发明的技术优点是：本发明方法生产的猪圆环病毒口服疫苗具有生产工艺简单，生产成本低，使用简单方便，安全性高等优点。

主权项

一种生产口服型新型猪圆环病毒疫苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将猪2型圆环病毒抗原蛋白的编码基因置于衣藻叶绿体特异表达的启动子和终止子之间，构建抗原蛋白基因的衣藻叶绿体表达盒；2）抗原蛋白基因表达盒与筛选抗性标记基因表达盒相连；3）在相连两个基因表达盒两侧分别连接上衣藻叶绿体基因组中的同源片段，构建成衣藻叶绿体特异表达载体；4）用所构建的载体通过基因枪轰击转化衣藻细胞；5）在含有抗生素的固体培养基中筛选具有抗性的绿色单藻落；6）通过抗性固体和液体培养基的多轮继代培养和筛选，获得外源基因在衣藻叶绿体中完全同质化的藻落；7）通过分子检测筛选出外源抗原蛋白基因在衣藻叶绿体中高效稳定表达的衣藻转化子；大规模培养生产高表达抗原蛋白的衣藻转化子，收集加工，用作猪圆环病毒病口服疫苗。