[发明专利]用单条线虫虫体或单个线虫虫卵鉴定植物寄生线虫的方法

摘要

本发明公开了一种用单条线虫虫体或单个线虫虫卵鉴定植物寄生线虫的方法，属于分子生物学检测鉴定技术领域。在分子生物学实验中由于线虫个体小，在提取单条线虫DNA模板的过程中存在容易混入其它试剂污染或者将单条线虫切断处理过程中易发生材料损失严重。本发明包含了一步直接在PCR管中简单刺破线虫虫体或虫卵的操作，不需要进行把线虫裂解液从其它载体转移到PCR管中，这样保证了线虫及其裂解物的存在，即DNA模板的存在，模板制备效率高。本发明对目前在植物寄生线虫鉴定研究等多个方面的分子诊断标记进行了PCR验证和部分进一步的酶切实验验证，效果显著。本发明还首次公布了用单个线虫虫卵作为模板进行植物寄生线虫的鉴定。

主权项

一种用单条线虫虫体或单个线虫虫卵鉴定植物寄生线虫的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）植物线虫样品的洗涤：在无菌的载玻片上滴无菌去离子水，用线虫挑针挑入单条线虫或单个虫卵；（2）PCR模板制备：将三蒸水滴到PCR管内壁上，挑入步骤（1）洗涤过的单条线虫或单个虫卵，用无菌昆虫针在体视显微镜下扎破线虫虫体或虫卵，把线虫裂解液甩入管底，该线虫裂解液作为PCR模板直接使用或者放入‑80℃超低温冰箱中保存备用；（3）PCR反应：选取线虫的保守区域设计引物，以步骤（2）制备的PCR模板为模板，进行PCR；（4）鉴定：将得到的PCR产物进行分析，从而确定线虫的种类。