[发明专利]一种用传代鸡胚成纤维细胞制备猪伪狂犬活疫苗的方法

摘要

本发明公开了用传代鸡胚成纤维细胞制备猪伪狂犬活疫苗的方法，首先将猪伪狂犬病毒（PRV）弱毒株接种原代鸡胚成纤维细胞（CEF），得到猪伪狂犬病毒弱毒种毒，然后制备DF-1细胞单层，将制备的PRV弱毒种毒接种DF-1细胞单层，置于恒温培养箱中培养，最后观察细胞病变选择合适的时间收获病毒液，收获的病毒液经真空冷冻冻干，即成猪伪狂犬活疫苗。该方法利用传代鸡胚成纤维细胞（DF-1）代替原代鸡胚成纤维细胞CEF培养PRV弱毒，并对培养工艺进行系统的优化，使该方法具有培养PRV病毒的操作更加简便，得到的病毒滴度更高，疫苗质量更加稳定、生产成本更低等优点。

主权项

一种用传代鸡胚成纤维细胞制备猪伪狂犬活疫苗的方法，其特征在于培养方法及步骤如下：（1）先制备原代鸡胚成纤维细胞（CEF），在CEF细胞制备后20‑28h，将猪伪狂犬病毒（PRV）弱毒株接种原代鸡胚成纤维细胞（CEF），得到猪伪狂犬病毒弱毒种毒；（2）制备传代鸡胚成纤维细胞(DF‑1)细胞单层，将DF‑1细胞用8%血清的DMEMDMEM培养基进行驯化，放置于37℃，CO2含量为5%的恒温培养箱中培养；（3）当DF‑1细胞传代后40～48h，细胞密度为90‑100%单层时，将制备的PRV弱毒种毒按0.8%～1%（v/v）的接种剂量接种到DF‑1细胞单层，加入含2%血清的DMEM培养基，放置于37℃，CO2含量为5%的恒温培养箱中继续培养；（4）接种病毒后DF‑1细胞会产生细胞病变，观察细胞病变，当细胞病变达到85%时，收获病毒液；（5）将收获的病毒液按1:1的比例与冻干保护剂混合，经真空冷冻冻干，即成猪伪狂犬活疫苗。