[发明专利]一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法

摘要

本发明涉及一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法，该方法是将猪细小病毒接种IBRS-2细胞，培养得到生产种毒；另外将IBRS-2细胞接种到激流式生物反应器中，然后将制备的猪细小病毒种毒接种到激流式生物反应器中培养的IBRS-2细胞，进行病毒的繁殖和培养；最后收获繁殖的病毒液，灭活，配苗即得猪细小病毒灭活疫苗。该方法使用激流式生物反应器和纸片载体避免了微载体生物反应器培养细胞产生的剪切力，进一步提高了细胞密度和活力，使细胞增殖病毒的能力增强。反应器能实时监控并自动调节细胞生长的最适条件，使每批收获的病毒液批间差异小，提高了疫苗质量稳定性、提高了生产效率、降低了生产成本。

主权项

一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法，其特征在于生产方法及步骤如下：（1）猪细小病毒种毒的制备：将从液氮中复苏的IBRS‑2细胞转瓶传代，待细胞长成单层时，弃去培养液，将猪细小病毒接种到IBRS‑2细胞，接种剂量为0.01MOI，接种后换2%血清的维持液培养，待IBRS‑2细胞病变达80%以上时收获病毒液，将收获的病毒液进行病毒滴度测定和无菌检验，病毒液的TCID50≥ 106.5TCID50/ml，无菌检测合格作为猪细小病毒种毒；（2）IBRS‑2细胞接种激流式生物反应器：先将转管培养的IBRS‑2细胞用胰蛋白酶进行消化，当消化下来的细胞液总体积为4升，细胞个数达到约2×109时，将细胞液用蠕动泵打入激流式反应器的纸片载体中，进行细胞的繁殖培养，培养细胞时激流式生物反应器的温度设定为37℃，pH设定为7.2～7.4，溶氧设定为30~60%；（3）生物反应器细胞接种猪细小病毒：当激流式生物反应器中细胞密度达到1×107个细胞/ml时，将制备的猪细小病毒种毒接种到激流式生物反应器中培养的IBRS‑2细胞，接种剂量为0.01MOI，接种后静置吸附1h，病毒培养时激流式生物反应器设定温度为36.5℃，pH设定为7.4～7.6，溶氧设定为30~60%，振荡器转速55rpm/min；（4）接毒60h后，收获繁殖的病毒液，灭活，配苗即得到猪细小病毒灭活疫苗。