[发明专利]利用木薯渣发酵生产中性蛋白酶和饲料添加剂的方法

摘要

本发明公开一种利用木薯渣发酵生产中性蛋白酶和饲料添加剂的方法。该方法为将斜面活化的枯草芽孢杆菌接种到种子培养基中，再接种到发酵培养基中进行摇瓶发酵或是发酵罐发酵，发酵培养基：木薯渣10～80g/L，豆粕粉10～40g/L，麸皮10～40g/L，Na2HPO44g/L，KH2PO40.3g/L，pH为7.5～8.5；将发酵液离心，上清为中性蛋白酶粗液，沉淀干燥即为含枯草芽孢干菌的饲料添加剂。所使用的木薯渣是木薯淀粉工业加工的废弃物，含有颗粒细小的淀粉和纤维素，有利于产酶微生物在不经过预处理的情况下直接水解和利用，不需外加酶水解即可用于中性蛋白酶发酵，具有负成本的特点，变废为宝，解决木薯淀粉工业中的环境污染问题。

主权项

一种利用木薯渣发酵生产中性蛋白酶和饲料添加剂的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）菌种的活化：将枯草芽孢杆菌接种到斜面培养基上，进行活化；斜面培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂20g/L，pH值为8.0；（2）种子液的制备：将活化的枯草芽孢杆菌接种到种子培养基中，25～30℃、150～200rpm培养至OD600为1.4～1.6；再以体积百分比5%的接种量转接种子培养基中，25～30℃、150～200rpm培养5～10h；将菌液离心，取沉淀，用生理盐水悬浮沉淀，即得种子液；种子培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，pH值为8.0；（3）中性蛋白酶发酵：中性蛋白酶发酵通过摇瓶好氧发酵或是发酵罐发酵进行：①摇瓶好氧发酵：将步骤（2）制备的种子液以体积百分比5%的接种量接到发酵培养基中，25～30℃、150～200rpm摇瓶好氧培养至少36小时；②发酵罐发酵：将步骤（2）制备的种子液以体积百分比5%的接种量接到发酵培养基中，控制转速200～1000rpm，通气量0.5～2.0vvm，使溶氧控制在30%，当pH值下降到6.5以下时，流加1mol/L盐酸控制pH在6.5，使用体积百分比为25%的泡敌进行泡沫控制，培养至少36小时；发酵培养基：木薯渣10～80g/L，豆粕粉10～40g/L，麸皮10～40g/L，Na2HPO44g/L，KH2PO40.3g/L，pH为7.5～8.5；（4）粗酶液分离及饲料添加剂的制备：将步骤（3）得到的发酵液离心，上清液为中性蛋白酶粗酶液；沉淀干燥后，得到饲料添加剂。