[发明专利]一种同时检测引起番茄黄化曲叶病4种病毒的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种同时检测引起番茄黄化曲叶病4种病毒的方法及试剂盒，这4种病毒分别为番茄黄化曲叶病毒、台湾番茄曲叶病毒、广东番茄黄化曲叶病毒和广东番茄曲叶病毒，属于植物保护领域。本发明设计了4对特异引物，通过提取待检病样品的总DNA，以所提DNA为模板、4对特异引物为引物在同一个体系中进行PCR反应，对PCR产物进行检测，根据PCR产物片段大小即可鉴别待检病样品是何种病毒侵染引起。本发明快速简便、准确、成本低，可同时检测出引起番茄黄化曲叶病的4种病毒，可应用到实际生产中，对植物病样进行准确有效地快速检测。

主权项

一种同时检测引起番茄黄化曲叶病4种病毒的方法，所述病毒分别为番茄黄化曲叶病毒、台湾番茄曲叶病毒、广东番茄黄化曲叶病毒和广东番茄曲叶病毒，其特征在于：包括如下步骤：（1）设计检测上述病毒的引物检测番茄黄化曲叶病毒的引物为TYF和TYR，PCR扩增产物大小为321bp；TYF：5’‑GACCTGGCCCACATTGTTTTGCCT‑3’；TYR：5’‑TCAGCAATCTGCCAACGACGCA‑3’；检测台湾番茄曲叶病毒的引物为TWF和TWR，PCR扩增产物大小为209bp；TWF：5’‑TGTCGTTACGTCGTGGTTCCGT‑3’；TWR：5’‑AATTCGCAGGCGGAGGGTTGAT‑3’；检测广东番茄黄化曲叶病毒的引物为TYGF和TYGR，PCR扩增产物大小为118bp；TYGF：5’‑TGCGAACTGGTCTCTTCTTCGC‑3’；TYGR：5’‑ACGCAGCACTCAAAAACTGGGCA‑3’；检测广东番茄曲叶病毒的引物为TGF和TGR，PCR扩增产物大小为81bp；TGF：5’‑TTGGTGAGAGAGCACTGTGGGT‑3’；TGR：5’‑TTCCAAAATGCCTCGTGCGGGA‑3’；（2）采用CTAB方法提取待检病样品的总DNA；（3）PCR反应以步骤（2）中提取的DNA为模板，步骤（1）中的4对引物为引物在同一体系中进行PCR反应；（4）结果鉴别将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中观察，如有321bp大小的特异性条带，即确认病样品是由番茄黄化曲叶病毒侵染引起的；如有209bp大小的特异性条带，即确认病样品是由台湾番茄曲叶病毒侵染引起的；如有118bp大小的特异性条带，即确认病样品是由广东番茄黄化曲叶病毒侵染引起的；如有81bp大小的特异性条带，即确认病样品是由广东番茄曲叶病毒侵染引起的；如产生上述2条、3条或4条特异带，则表明病样品分别是由相应的2种、3种或4种病毒混合侵染引起的；如无上述任何特异条带，则该病样品不是4种病毒中任何1种侵染引起的。