[发明专利]一种通过花药培养获得百脉根再生植株的方法

摘要

本发明涉及一种通过花药培养获得百脉根再生植株的方法，属于牧草育种技术领域。本方法的步骤为：A)取单核靠边期花蕾，用冰盒带至实验室后4℃冷藏2-3d；B)次氯酸钠消毒后利用体式显微镜剥离后置于愈伤组织诱导培养基上培养；C)暗培养20d后，继代3-4次，每次间隔15d。将继代后的愈伤组织置于不定芽诱导培养基上培养，诱导愈伤组织形成芽；D)芽复壮培养后，置于生根培养基上培养15-20d，诱导根，E)炼苗后移栽可获得再生苗。以上操作中，B)-D)均在无菌环境中进行，C)中的暗培养需借助生化培养箱，C)中不定芽的形成和D)中根的形成均需要人工气候箱。

主权项

一种通过花药培养获得百脉根再生植株的方法，包括外植体的准备、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化培养、芽生根的步骤，其特征在于：a.外植体的准备：选单核靠边期的花药灭菌处理备用；b.愈伤组织的诱导：无菌环境下剥出花药，接种于愈伤组织诱导培养基上，该培养基的配方为NB+2,4‑D 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L +KT 2.0 mg/L，蔗糖90 g/L，琼脂6 g/L，pH 5.8；接种密度为40‑50个/皿，用封口膜封口后，放置于生化培养箱25 ℃暗培养至长出愈伤组织，然后利用NB+NAA 0.3 mg/L + 2,4‑D 0.3 mg/L，蔗糖30 g/L，琼脂6 g/L，pH 5.8继代培养，培养条件：温度25±2 ℃，16 h光照、8 h黑暗，湿度50‑70 %，光照强度1500‑2000 lx；c. 愈伤组织的分化培养：将愈伤组织继代2‑3次，每次15 d；然后转入愈伤组织分化培养基，诱导芽的分化；分化培养基的配方为MS+ KT 1.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L，蔗糖30 g/L，琼脂6 g/L，pH 5.8；培养条件：温度25±2 ℃，16 h光照、8 h黑暗，湿度50‑70%，光照强度2000‑2500 lx；d.生根培养：分化培养30 d后，将产生的不定芽转入MS基本培养基进行不定芽复壮培养；不定芽长至2‑3 cm时转入1/2 MS+0.5 mg/L NAA，蔗糖10 g/L，琼脂6 g/L，pH 5.8的培养基进行生根培养；培养条件为：温度25±2 ℃，16 h光照、8 h黑暗，湿度50‑70 %，光照强度2500‑3000 lx。