[发明专利]一种重组制癌肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组制癌肽的制备方法，根据肿瘤抑素的N-端74～98氨基酸功能肽(25个氨基酸)和185-191氨基酸功能肽(7个氨基酸)两个功能区与人IgG3上游铰链区的序列，进行序列设计；根据所设计的序列，设计并合成引物F1、F2、R1，以F2为模板，R1为引物进行延伸反应；以延伸反应产物为模板，F1、R1为引物进行PCR反应，得到大小为129bp的制癌肽基因OP。构建制癌肽重组表达质粒pET-SUMO-OP，将重组质粒pET-SUMO-OP进行原核表达，并进行SDS-PAGE鉴定；纯化重组融合蛋白，得到重组制癌肽，该肽具有靶向肿瘤干细胞和血管内皮细胞治疗人恶性肿瘤作用。

主权项

一种重组制癌肽的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：步骤一，根据肿瘤抑素两个功能区和IgG3上游铰链区的序列，进行序列设计；步骤二，根据所设计的序列，设计并合成引物F₁、F₂、R₁，以F₂为模板，R₁为引物进行延伸反应；步骤三，以延伸反应产物为模板，F₁、R₁为引物进行PCR反应，并进行产物鉴定；步骤四，回收PCR产物，构建重组pET‑SUMO‑OP表达质粒，并对重组pET‑SUMO‑OP表达质粒进行序列分析；步骤五，将重组pET‑SUMO‑OP质粒在大肠杆菌中表达，并进行SDS‑PAGE鉴定；步骤六，纯化重组融合蛋白，并分析制癌肽空间构象。