[发明专利]NIK抑制剂基于细胞的筛选测定

摘要

本发明涉及用于筛选和鉴定NIK蛋白质抑制剂的基于细胞的测定。根据本发明的方法允许鉴定抑制与IKK1磷酸化有关的NIK活性的化合物。该测定组合使用经转染的人胚肾（HEK）细胞与使用“受体”珠和“供体”珠的非放射性、均相接近测定。

主权项

用于鉴定抑制NIK活性的化合物的方法，其包括：（a）提供在培养基中含有编码NIK的DNA和编码IKK1‑KD的DNA的HEK细胞（经转染的HEK细胞）；（b）在37℃ +/‑ 2℃的温度下在5% CO2的存在下，使所述经转染的HEK细胞连同和不连同待测试的候选分子温育24小时；（c）去除所述培养基；（d）裂解所述细胞；（e）将受体复合物随后将供体复合物加入所述细胞裂解产物中；（f）用激光照射激发所述细胞裂解产物，和（g）使用基于珠的发光接近检测系统，测量细胞裂解产物被激光激发后产生的信号，其中得自细胞裂解产物的信号的减少或不存在指示NIK介导的IKK1‑KD磷酸化的抑制，所述细胞裂解产物来源于在测试化合物的存在下培养的经转染的HEK细胞，并且其中所述受体复合物包含分子包被的珠和与所述IKK1‑KD蛋白质结合的结合配偶体，并且所述供体复合物包含分子包被的珠和与所述IKK1‑KD蛋白质结合的结合配偶体。