[发明专利]经修饰的百日咳博德特氏菌菌株

摘要

提供了衍生于母株Tohama的重组百日咳博德特氏菌菌株。所述新菌株使用等位基因交换载体pSS4245通过同源重组获得，这容许替换细菌染色体的部分而不会留下任何附属突变。编码PT亚基SI的片段经过替换而引入两个导致PT毒性活性失活的突变。这种菌株能够进一步修饰而表达增量的rPT和/或PRN。具有其启动子和ptl终止子并含有上述突变的ptx‑ptl操纵子的五个PT结构基因的ptx簇的第二拷贝能够插入所述染色体上其他位置。另外，所述PRN基因的第二拷贝能够插入所述染色体上。在这两种情况下，遗弃的基因位点选择为所述插入位点而避免引入不期望的遗传改变。

主权项

一种经遗传修饰的百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)菌株，其中：百日咳毒素S1基因经修饰而包括Arg9→Lys9和Glu129→Gly129突变；且ptx操纵子的一个拷贝整合到经修饰的百日咳博德特氏菌菌株的染色体的非功能区，由此经修饰的天然ptx操纵子和整合的ptx操纵子分开定位于所述染色体中，其中整合的ptx操纵子包含一组S1‑S5基因且不包含任何ptl基因，且其中所述整合的ptx操纵子的S1基因也经修饰而包括Arg9→Lys9和Glu129→Gly129突变；其中使用包含I‑SceI核酸酶基因的载体pSS4245将所述突变和所述整合的ptx操纵子引入所述百日咳博德特氏菌菌株，由此经修饰的菌株不包括任何整合的抗生素抗性基因和任何其它瘢痕，且能够表达去毒的百日咳毒素(rPT)，且其中经修饰的百日咳博德特氏菌菌株能够表达相对于仅具有一个ptx操纵子的菌株水平增强的去毒的百日咳毒素，并且还能够表达丝状血凝素(FHA)和百日咳杆菌粘附素。