[发明专利]可同时检测副溶血弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌的多重PCR检测方法无效
申请号: | 201310017980.1 | 申请日: | 2013-01-18 |
公开(公告)号: | CN103103266A | 公开(公告)日: | 2013-05-15 |
发明(设计)人: | 李华;李强;冯春明;叶仕根;王轶南 | 申请(专利权)人: | 大连海洋大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04 |
代理公司: | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人: | 闪红霞 |
地址: | 116000 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明公开一种可同时检测副溶血弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌的多重PCR检测方法,首先制备被检测物的DNA模板并置于反应管中;将三种弧菌引物放入a步骤的反应管中进行多重PCR反应,引物浓度依次为1~20pmol/μl、1~20pmol/μl、1~30pmol/μl;副溶血弧菌的引物序列为:5’-GCAGCTGATCAAAACGTTGAGT-3’、5’-ATTATCGATCGTGCCACTCAC-3’,创伤弧菌的引物序列为:5’-TTCCAACTTCAAACCGAACTATGAC-3’、5’-ATTCCAGTCGATGCGAATACCGAATACGTTG-3’、溶藻弧菌的引物序列为:5’-CGAGTACAGTCACTTGAAAGCC-3’、5’-CACAACAGAACTCGCGTTACC-3’。 | ||
搜索关键词: | 同时 检测 溶血 弧菌 创伤 多重 pcr 方法 | ||
【主权项】:
一种可同时检测副溶血弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌的多重PCR检测方法,其特征在于依次按如下步骤进行:a. 制备被检测物的DNA模板并置于反应管中;b. 将副溶血弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌引物放入a步骤的反应管中进行多重PCR 反应,所述副溶血弧菌引物浓度为1~20 pmol/μl,所述创伤弧菌引物浓度为1~20 pmol/μl,所述溶藻弧菌引物浓度为1~30 pmol/μl;所述副溶血弧菌的引物序列为:flaE‑F:5’‑ GCAGCTGATCAAAACGTTGAGT‑3’flaE‑R: 5’‑ATTATCGATCGTGCCACTCAC‑3’所述创伤弧菌的引物序列为: vvh‑F: 5’‑TTCCAACTTCAAACCGAACTATGAC‑3’ vvh‑R: 5’‑ATTCCAGTCGATGCGAATACGTTG‑3’所述溶藻弧菌的引物序列为: col‑F:5’‑CGAGTACAGTCACTTGAAAGCC‑3’col‑R:5’‑CACAACAGAACTCGCGTTACC‑3’所述多重PCR 反应条件为:94℃预变性3min;94℃ 30s,52.0‑61℃ 30s,72℃ 1min,共32个循环;72℃终延伸7min; 所述多重PCR反应体系为25μl:1μlDNA模板,2.5μl不含Mg2+的10×PCR buffer,0.5µl的10mM的dNTP,2µl的25mM的Mg2+,0.15µl的Taq酶(50U),引物各1μl,双蒸水17.85µl。
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