[发明专利]一种用磁性微球固定化米糠谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法

摘要

一种用磁性微球固定化米糠谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的方法，属于米糠深加工技术领域。在传统制备γ-氨基丁酸(GABA)的方法中，所得产品蛋白、糖等杂质含量高，GABA纯度低，因此需要一种方法来提高GABA产品的纯度。本发明以稻谷加工后的副产物——新鲜米糠为原料，提取谷氨酸脱羧酶，以磁性壳聚糖微球作为固定化材料，来固定谷氨酸脱羧酶，并用此固定化酶来转化底物谷氨酸钠为GABA。该方法具有固定化酶易分离、可反复回收利用、反应过程温和，且GABA制备液成分相对简单等优点，对实现米糠的综合利用价值和提高其经济效益有重要的意义。

主权项

一种用磁性微球固定化米糠谷氨酸脱羧酶制备γ‑氨基丁酸的方法，其特征是将米糠用酶提取液提取出谷氨酸脱羧酶，与制备好的磁性壳聚糖微球进行微粒反应，得到磁性固定化谷氨酸脱羧酶；将此固定化酶与反应液混合，加入0.01‑0.05mol/L的谷氨酸钠作为底物，摇床反应得到γ‑氨基丁酸制备液，具体工艺如下：(1)提取谷氨酸脱羧酶：新鲜米糠加入酶提取液，提取谷氨酸脱羧酶；(2)磁性壳聚糖微球的制备：0.5g磁性纳米微粒与20mL2.5％的壳聚糖乙酸溶液混合，在搅拌下缓慢加入到80mL液体石蜡和4mL Span‑80混合溶液中，常温搅拌30min，加入10mL8％的戊二醛，40℃搅拌1h，再用1mol/LNaOH溶液调pH至9‑10，70℃搅拌2h，用磁铁吸出微球，并先后用石油醚、丙酮、蒸馏水反复洗涤，于60℃下真空干燥；(3)固定谷氨酸脱羧酶：0.05mol/LPBS缓冲液浸泡磁性壳聚糖微球12h，使其充分溶胀；加入戊二醛进行交联，用PBS缓冲液反复洗涤磁性微球；再加入一定浓度的酶液进行固定，用PBS缓冲液反复洗涤磁性微球；(4)制备γ‑氨基丁酸：将固定化酶与反应液混合，加入0.01‑0.05mol/L的谷氨酸钠作为底物，摇床反应得到γ‑氨基丁酸制备液。