[发明专利]一种新型有机-无机复合纳米整体酶解柱的制备方法

摘要

本发明涉及一种新型有机-无机复合纳米整体酶解柱的制备方法，具体步骤为：将带活性基团的无机纳米材料掺杂到有机整体材料中，在毛细管内制备有机-无机复合基质；对整体材料进行表面改性，键合活性基团，并将一种蛋白酶与其结合，进一步将另一种蛋白酶结合到纳米材料表面的活性基团上，得到含有两种酶解蛋白的有机-无机复合纳米整体酶解柱。本发明的优势在于：同时固定两种蛋白酶，可以起到更好的酶解效果，此外，采用纳米材料掺杂，可以极大地提高基质的比表面积，结合更多的蛋白酶，也能够提高材料的机械强度。通过不同的结合方式固定两种蛋白酶，且此方法制备简单，容易操作。

主权项

一种新型有机‑无机复合纳米整体酶解柱的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：一、有机‑无机复合基质的制备将修饰活性基团的无机纳米材料掺杂到有机整体材料中，20～80℃下反应12～24h，在毛细管中制备有机‑无机复合基质；二、对有机整体材料改性，键合活性基团将戊二醛溶液连续泵入步骤一得到的有机‑无机复合基质中反应12～24h，对有机整体材料进行改性，在其表面化学键合，得到含醛基化的有机‑无机复合基质；三、蛋白酶的固定在0～10℃的条件下将含有1～10mg/mL第一种蛋白酶的磷酸盐缓冲液连续泵入到步骤二得到的有机‑无机复合基质中反应12～24h，将此种蛋白酶结合到醛基化的有机‑无机复合基质表面；将含有0.1～1mol/L Cu(II)的水溶液通入键合第一种蛋白酶的有机‑无机复合基质反应2～10h，将Cu离子螯合到无机纳米材料表面的活性基团上，再进一步通入1～10mg/mL第二种蛋白酶磷酸盐缓冲液将第二种蛋白酶结合到无机纳米材料表面的铜离子上；最后用pH为7.0～8.5的缓冲液洗去未固定的第一种蛋白酶和第二种蛋白酶，得到含有两种酶解蛋白的有机‑无机复合纳米整体酶解柱。