[发明专利]一种辣根过氧化物酶黑色显色剂及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种辣根过氧化物酶黑色显色剂及其制备方法与应用，属于生物技术领域。制备辣根过氧化物酶黑色显色剂的原料包括4‑CN、DAB、硫酸镍铵、氯化钴、咪唑、聚乙二醇辛基苯基醚、硼酸、MgCl2、MnCl2、亚硝基铁氰化钠、甜菜碱、明胶、四氢呋喃、丙酮、硫酸葡聚糖、1×TBS、H2O2。将一定量的所述原料混匀即得到辣根过氧化物酶黑色显色剂，该辣根过氧化物酶黑色显色剂的用于辣根过氧化物酶显色，兼具了DAB的高灵敏和4‑CN色差视觉效果好的优点，显色产物为黑色沉淀，与背景对比强烈，方便结果判断。

主权项

一种辣根过氧化物酶黑色显色剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)以水为溶剂分别配制：无水乙醇溶解的25mg/mL 4‑氯‑1‑萘酚(4‑CN)，50mg/mL 3,3’‑二氨基联苯胺(DAB)，0.1M醋酸铵溶解的50mg/mL硫酸镍铵，0.5g/mL氯化钴，0.5g/mL咪唑，1M硼酸，20mg/mL MgCl2，20mg/mL MnCl2，25mg/mL亚硝基铁氰化钠，12mg/mL甜菜碱，2mg/mL明胶，0.2g/mL硫酸葡聚糖，1％(V/V)四氢呋喃，1％(V/V)丙酮；(2)取25mg/mL 4‑CN 2.5μL，50mg/mL DAB 2.5μL，50mg/mL硫酸镍铵5μL，0.5g/mL氯化钴0.5μL，0.5g/mL咪唑0.5μL，1M硼酸1μL，20mg/mL MgCl2 1μL，20mg/mL MnCl2 1μL，25mg/mL亚硝基铁氰化钠1μL，12mg/mL甜菜碱1μL，2mg/mL明胶1μL，0.2g/mL硫酸葡聚糖1μL，1％(V/V)四氢呋喃1μL，1％(V/V)丙酮1μL，聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X‑100)1μL，30wt％H2O2 1μL，1×TBS缓冲液979μL混匀得到辣根过氧化物酶黑色显色剂。