[发明专利]生物活性胶原提取方法

摘要

本发明涉及一种生物活性胶原提纯方法，包括前处理步骤，对新鲜牛跟腱前处理制成碎片备用；酸法粗提步骤，取1重量份碎片加入4~8重量份醋酸或柠檬酸溶液并搅拌，然后经粗过滤、高速离心粗滤液后取上清液备用；酶法去端基步骤，调节上清液pH至9.0，再加入0.1~0.3%重量份的无花果蛋白酶进行酶解消化；梯度盐析步骤，用沉淀剂对酶解后的溶液进行多梯度盐析处理，获得溶解有胶原的溶液；透析步骤，将溶解有胶原的溶液装入透析袋中，依次用醋酸溶液和纯水为透析外液进行透析，得到具有生物活性的胶原原液。本发明结合酸法和酶法两种现有胶原提取方法，既克服了酸法产率低又克服了酶法水解不彻底的缺点，且采用非动物源性蛋白酶，减小了关于动物源性的风险。

主权项

一种生物活性胶原提取方法，其特征在于，包括如下步骤：前处理步骤，将新鲜牛跟腱、牛皮或猪皮用冷却纯水清洗后切成小片，采用机械搅拌、超声波处理以及阴离子表面活性剂结合的脱细胞法脱去动物组织中的细胞，将脱去细胞的组织用冷却纯水清洗，然后放入组织捣碎机中捣成组织碎屑，所述组织碎屑经清洗过滤后，再用质量百分比为0.1~1.5%的氢氧化钠溶液浸泡2~4小时，再次清洗过滤将组织碎屑备用；酸法粗提步骤，取1重量份备用的组织碎屑于烧杯中，加入0.05~0.5mol/L的醋酸或柠檬酸溶液4~8重量份，搅拌10~20小时，使组织碎屑充分溶胀，然后用滤网进行粗过滤，将粗滤液进行高速离心，取上清液备用；酶法去端基步骤，用氢氧化钠溶液或者碳酸钠溶液缓慢调节上清液的pH至8.0~8.5，然后加入0.1~0.3%重量份的无花果蛋白酶，搅拌均匀，酶解消化10~30小时；梯度盐析步骤，用5~8mol/L的沉淀剂对酶解后的溶液进行多梯度盐析处理，获得溶解有胶原的溶液；透析步骤，将溶解有胶原的溶液装入透析袋中，用0.01~0.03mol/L的醋酸溶液为透析外液，内外液体积比为5~10倍，每8小时更换一次透析外液，透析1~2天，然后将透析外液换成纯水，内外液比例5~10倍，每12小时更换一次透析外液，透析2~3天，即得到具有生物活性的胶原原液，所获得的胶原原液保留着三螺旋结构，生物活性高，热变性温度达101.57℃；其中原料前处理步骤中所述脱细胞法具体操作如下：用质量百分比为5~10%的氯化钠溶液浸泡搅拌1~2小时，然后用超声波处理0.5~1小时，然后用质量百分比为0.2~0.3%的十二烷基磺酸钠溶液浸泡搅拌2~3小时，再用1~5%氯化钠溶液浸泡搅拌1~2小时，然后再用超声波处理0.5~1小时，然后用质量百分比为0.05~0.2%的十二烷基磺酸钠溶液浸泡搅拌2~3小时。