[发明专利]一种利用2-DE技术筛选钝齿棒杆菌内源高表达启动子的方法

摘要

一种利用2-DE技术筛选钝齿棒杆菌内源高表达启动子的方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱技术鉴定出钝齿棒杆菌胞内高表达蛋白点。克隆其编码基因启动子，分别命名为P-argC、P-argG、P-argF、P-ilvC和P-serA，替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入cat基因，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定CAT的活性，各启动子在重组菌中的活性：P-argG＞P-argF＞P-ilvC＞P-serA＞P-argC。这是首次获得来自钝齿棒杆菌组成型高表达启动子，为钝齿棒杆菌高表达外源基因提供了有效的工具。

主权项

一种利用2‑DE技术筛选钝齿棒杆菌内源高活性启动子的方法，其特征是：通过2‑DE技术筛选钝齿棒杆菌内高表达蛋白质，通过MALDI‑TOF‑MS及MS/MS分析鉴定和数据库检索，鉴定出这些蛋白的种类，在GENBANK网站上检索出这些蛋白的编码基因序列，克隆其上游的启动子序列。