[发明专利]一种测定重组腺相关病毒滴度的定量PCR方法有效
| 申请号： | 201310046098.X | 申请日： | 2013-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN103114152A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 许瑞安;王峰;崔秀灵 | 申请（专利权）人： | 许瑞安 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京华科联合专利事务所 11130 | 代理人： | 杨厚;王为 |
| 地址： | 362021 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种实时荧光定量PCR检测重组腺相关病毒（rAAV）滴度的方法，通过分析AAV的空间构象，确定可能影响其检测的空间构象位置及消除方法，本发明比传统的方法能够显著提高重组腺相关病毒滴度检测的准确度，具有广泛的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 测定 重组 相关 病毒 定量 pcr 方法 | ||
【主权项】：
一种检测重组腺相关病毒滴度的定量PCR方法，其特征是，所述方法系利用腺相关病毒基因组共有的空间构象末端重复序列ITR中的SmaI限制性酶切位点，通过SmaI酶切，消除影响定量PCR检测重组腺相关病毒滴度的干扰，再以酶切后的重组腺相关病毒DNA为模板进行实时定量PCR检测，具体实施步骤包括：1）将重组腺相关病毒感染细胞，扩增制备重组腺相关病毒；2）提取纯化重组腺相关病毒DNA；3）用SmaI酶切处理腺相关病毒DNA，破坏ITR的构象；4）以酶切后的重组腺相关病毒DNA为模板，用不同元件设计引物进行实时定量PCR检测重组腺相关病毒的滴度。
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