[发明专利]一种从土壤中分离尖孢镰刀菌的方法

摘要

本发明提供一种从土壤中分离尖孢镰刀菌的方法，将受尖孢镰刀菌侵染的土壤研细并过20目筛，加入琼胶液，搅拌后静置至病原菌悬浮；吸取悬浮液置于选择性培养基上，于23～26℃、无光条件下，培养至菌丝体长出并形成菌落；挑取菌丝体移植至新的选择性培养基上，重复培养2～3次；从菌落中挑取菌丝体移植至PSA培养基上，于23-26℃、无光条件下，培养2～4天；选择单独的菌丝，并用毛细管从该菌丝顶端插入后，连同培养基一同切下，置于新的PSA培养基上，于相同条件下，培养3～4天，得尖孢镰刀菌。为监测土壤中尖孢镰刀菌的数量及土壤消毒效果提供技术支撑。

主权项

种从土壤中分离尖孢镰刀菌的方法，经过下列各步骤：1）将受尖孢镰刀菌侵染的土壤研细并过20目筛，按0.01～0.02g土壤/ml琼胶液的量，在土壤样中加入质量浓度为0.1～0.2%的琼胶液，搅拌均匀后静置至病原菌悬浮；2）按悬浮液∶培养基=0.5～1∶25的体积比，吸取步骤1）的悬浮液置于选择性培养基上，于23～26℃、无光条件下，培养至菌丝体长出并形成菌落；所述选择性培养基如下：每升蒸馏水中含有下列组分：磷酸二氢钾KH2PO4              1.0g硫酸镁MgSO4·7H2O             0.5g蛋白胨                         5.0g琼胶                           20.0g青霉素                         30～100 mg链霉素                         30～50 mg利福平                         50～200mg五氯硝基苯                     50～150 mg；3）按菌丝体∶培养基=0.1～0.2∶25的体积比，从步骤2）菌落中挑取菌丝体移植至新的与步骤2）相同的选择性培养基上，于23～26℃、无光条件下，培养至菌丝体长出并形成菌落，如此重复培养2～3次，得到菌落；4）按菌丝体∶培养基=0.1～0.2∶25的体积比，从步骤3）菌落中挑取菌丝体移植至PSA培养基上，于23～26℃、无光条件下，培养2～4天，得菌落；所述PSA培养基是：每升水中含有马铃薯200g、蔗糖20g、琼胶20g；5）在解剖镜下，从步骤4）所得菌落中选择单独的菌丝，并用毛细管从该菌丝顶端插入后，连同培养基一同切下，置于新的与步骤4）相同的PSA培养基上，于23～26℃、无光条件下，培养3～4天，得尖孢镰刀菌。