[发明专利]一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法，涉及分子生物学领域中提取总RNA的方法。本方法主要是：用液氮研磨荷花花瓣成粉末状，加入65^oC预热的细胞裂解液破裂细胞，并添加乙酸钾溶液作为沉淀辅助剂，经氯仿抽提后离心沉淀RNA，最后用焦炭酸二乙酯处理水溶解。本发明所获得的总RNA质量和产率高；步骤简单，耗时短；试剂便宜；适用于在次级代谢产物含量高的荷花花瓣中大量提取高质量RNA。

主权项

一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法，其特征在于包括下列步骤：①称取0.2g荷花花瓣于液氮预冷的研钵中迅速充分地研磨成粉末状；②将粉末状样品转入‑1.5mL RNase free的离心管中，加入1mL 65^oC预热的细胞裂解液，混匀后继续65^oC温育10min，期间摇匀2～3次； ③加入300μL的乙酸钾溶液，上下温和颠倒混匀15～20次，室温静置3～5min；④4^oC，12000rpm，离心5min，取上清于一新的离心管中；⑤加入300μL氯仿：异戊醇=24：1，震荡15s，4^oC，12000rpm，离心30s使分层，取上层水相于一新的离心管中，重复此步骤1～2次；⑥加入与上层水相等体积的‑20^oC预冷的异丙醇，置于‑20^oC冰箱30min；⑦在4^oC、12000rpm的条件下，离心5min使RNA沉淀；⑧移去上清，用1mL的‑20 ^oC预冷的75%乙醇洗涤沉淀两次，在超净工作台内吹干后，加入10～20μL的焦炭酸二乙酯处理水溶解RNA，于‑80 ^oC保存；    所述的1升细胞裂解液中含有下列组分：十二烷基硫酸钠                        40克三羟甲基氨基甲烷盐酸盐                200毫摩尔乙二胺四乙酸　　　　　　　　　　　　　0.5毫摩尔聚乙烯吡咯烷酮　　　　　　　　　　　　20克β‑巯基乙醇　　　　　　　　　　　　　 10毫升其它为焦炭酸二乙酯处理水。