[发明专利]一种苯胺绿人工抗原的制备方法

摘要

本发明涉及一种苯胺绿人工抗原，尤其涉及一种苯胺绿人工抗原的制备方法。按以下步骤进行：制备人工半抗原-半抗原4-MGC的合成→制备苯胺绿人工抗原-苯胺绿-BSA的合成。一种苯胺绿人工抗原的制备方法，合成工艺先进，特异性强，得到的苯胺绿人工抗原用于免疫新西兰白兔，检测结果表明，苯胺绿人工抗原的免疫血清的效价为1：72000，完全可用于免疫分析中，为苯胺绿的检测提供更加方便快速准确的途径。

主权项

一种苯胺绿人工抗原的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：(1) 、制备人工半抗原‑‑‑半抗原4‑MGC 的合成: 　　(a)、 将质量摩尔比为2:1的N,N‑ 二甲基苯胺和4‑ 羧基苯甲醛加入到圆底烧瓶中，N,N‑ 二甲基苯胺为3g，在温度为100℃下搅拌反应6小时，形成反应液；反应结束后反应液用乙醚提取，转干，经重结晶后得到白色固体产物Ⅰ；     (b)、 在产物Ⅰ中加入苯30ml以及催化量Amberlyst 15 resin一起放入圆底烧瓶中，在氮气的保护下,在温度为130℃下进行回流搅拌过夜，形成溶剂；反应结束后，将溶剂减压后转干，用乙醚提取得到产物Ⅱ;      (c)、 将产物Ⅱ经硅胶柱层析纯化后,提取得到半抗原4‑MGC的白色固体；(2) 、制备苯胺绿人工抗原‑‑‑苯胺绿‑BSA的合成: 　　(d)、 称取0.425g 的半抗原4‑MGC和0.225g 的N‑ 羟基琥珀酰亚胺溶于10.0ml的N,N‑ 二甲基甲酰胺中,存放于烧杯中,再将溶解了0.255g N，N‑ 二环己基碳二亚胺的10.0mlN,N‑ 二甲基甲酰胺的溶液慢慢滴加,边滴加边磁力搅拌,搅拌结束后在温度为20℃下进行磁力搅拌过夜,得到A液；    (e) 、将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液；(f) 、在常温磁力搅拌条件下,将A液逐滴加入到装有10ml的B液中,得到人工抗原混合液，在温度为4℃的冰箱内进行磁力搅拌过夜;    (g)、 制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.2～7.4；    (h)、 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中进行透析，在温度为4℃下进行搅拌透析,每4小时换一次PBS缓冲液,透析时间为2天，形成透析液, 紫外扫描透析液无小分子吸收峰时,将产物离心取上清,在无菌条件下通过0.2μm 的滤膜，即得到人工抗原：苯胺绿‑牛血清蛋白。