[发明专利]一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法有效

专利信息
申请号: 201310097217.4 申请日: 2013-03-22
公开(公告)号: CN104059880B 公开(公告)日: 2017-02-08
发明(设计)人: 姜桦;马晓玲;陈彤 申请(专利权)人: 复旦大学附属妇产科医院
主分类号: C12N5/095 分类号: C12N5/095
代理公司: 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 代理人: 吴桂琴
地址: 20001*** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明属于细胞生物学领域,涉及肿瘤干细胞研究,具体涉及一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法。本发明方法简化了卵巢肿瘤SP细胞分选过程,采用改良的孵育液,可有效的用于贴壁培养的卵巢肿瘤细胞系的SP细胞分选;不需要酶解消化过程,细胞直接在贴壁的状态下进行孵育染色,完成染色后再将细胞酶解成单细胞,在悬浮状态上机分选,可以提高分选时的细胞活性。本方法能简便、快速、有效分选得到SP细胞,可明显节省实验流程操作时间,获得的SP细胞可用作肿瘤干细胞的表面标志物,对后续的实验研究具有明显的实用价值。
搜索关键词: 一种 分选 卵巢 肿瘤 细胞 方法
【主权项】:
一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法,其特征在于,将细胞直接在贴壁的状态下进行孵育染色,完成染色后再将细胞酶解成单细胞,在悬浮状态上机分选,获得侧群细胞;其包括步骤:1)进行人卵巢肿瘤细胞系细胞培养,所述的人卵巢肿瘤细胞系是人卵巢肿瘤细胞系ES‑2和OVCAR‑3;2)培养的细胞以5×105/L的密度接种于培养器皿中,使其贴壁生长,直接Hoechst 33342染色孵育90分钟,无需每15分钟振荡混匀,其中,采用的孵育液由下述的成分组成,其PH值须调整到7.0;3)孵育后用预冷HBSS液洗涤并酶解成单细胞悬液,离心弃去上清液后重悬浓缩细胞,在悬浮状态上机分选,获得侧群细胞。
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