[发明专利]一种皮肤干细胞活性素的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，本发明公开了一种皮肤干细胞活性素的制备方法及其应用。本发明的活性素只从与皮肤组织有最密切关系的皮肤干细胞中提取，与其他从包含多种干细胞的杂干细胞提取的活性素不同，是更具有皮肤个性化的活性素。本发明的另一个特点是不仅从干细胞分泌物中提取，而且将皮肤干细胞破碎，从干细胞的内容物中提取活性组份，使活性组份的含量更多、更丰富。本发明的活性素可广泛用于护肤、健肤及美容化妆品。

主权项

一种皮肤干细胞活性素的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤为：a）收集儿童包皮等新鲜皮肤，低温保存下运回制备车间，用4℃－6℃的生理盐水清洗三次。剪成皮粒，加入10－30倍的人工体液中，用组织打碎机打碎成皮浆；b）向皮浆加入适量胶原酶消化4～48小时，低温离心，弃去上清液。沉积底层的细胞团，用人工体液洗涤三次，每次离心，弃去上清液，用无血清培养基培养洗净的混合细胞24小时；c）将混合细胞染色，用荧光细胞分离器分离出干细胞，主要是皮肤干细胞；d）将皮肤干细胞用无血清培养基进行传代扩增，扩增至适当倍数后，连培养基一同移入细胞破碎机中将干细胞破碎；e）用核酸酶和基因酶将干细胞破碎后释出的DNA和RNA分解为戊糖、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、磷酸及其盐等基础物质；f）低温离心，收集上清液，底部沉积物用人工体液洗涤一次，离心，收集上清液，将两上清液合并，将合并的上清液以一定流速通过分子筛吸附柱，以除去残存的蛋白质及其他生物分子，再用人工体液将吸附在柱上的中、低分子洗脱出来；g）在透析机上用超纯水透析去除洗脱液中的电解质离子，冷冻干燥得本发明产品的冻干粉。