[发明专利]一种制备多能性干细胞的方法

摘要

本发明提供了一种利用可调控的蛋白稳定系统制备多能性干细胞的方法，该方法是将目的载体待调控因子前加上降解区域。当在外源OCT4前添加降解区域时，通过添加TMP，可稳定待调控因子蛋白，并获得诱导的多能性干细胞，不添加TMP，则不能获得多能性干细胞克隆；通过改变TMP的添加剂量和添加时间，可以控制外源因子的表达计量及表达阶段，从而得到不同的多能性细胞诱导效率。本发明的方法为诱导多能性细胞的获取提供了一个可调控的途径。

主权项

一种甲氧苄胺嘧啶TMP调控系统表达载体，其特征在于，包括piggyBac载体以及转座酶载体PBase；所述piggyBac载体是以piggyBac转座子载体为骨架载体，该载体包括从ZGs载体上获得的PB 5′端和PB 3′端，采用单顺反子读码框架，以启动子EF1α启动转录，三个外源基因OCT4、KLF4和SOX2之间由2A序列连接，DD基因位于上述外源基因OCT4、KLF4或SOX2的5′端；转座酶载体PBase中含有CAG启动子；其中，所述DD基因为带有R12Y和Y100I突变的大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因，并根据人的密码子偏好性进行了优化；所述ZGs载体的核苷酸序列如Seq ID No:6所示；所述piggyBac载体的核苷酸序列如Seq ID No:1、2或3所示。