[发明专利]脱硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法

摘要

本发明涉及一系列脱硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法，分别以脱-2-O硫酸化肝素衍生物、脱-6-O硫酸化肝素衍生物、脱-N位硫酸化再乙酰化肝素衍生物为配基，琼脂糖凝胶颗粒为载体，通过活化后的琼脂糖凝胶颗粒与各肝素衍生物在强还原剂存在条件下，发生还原氨化反应制备得到稳定的系列脱硫酸化肝素衍生化色谱材料。本发明首次将不同脱硫酸化位点的肝素衍生物用于亲和色谱材料的制备，得到的三种高稳定性、高活性的肝素衍生物亲和色谱，它们可用于肝素的结构与功能的研究，以及对功能性蛋白质、肿瘤细胞与病毒等的分离与富集。

主权项

一种脱‑2‑O硫酸化肝素衍生物亲和色谱材料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：（1）琼脂糖凝胶颗粒的活化：取洗净抽干后的凝胶颗粒，按每1g凝胶溶于1‑3ml的0.6M NaOH中，并且加入0.1‑0.2ml 环氧氯丙烷，在40℃水浴摇床中反应2小时，再充分水洗，抽干，加入2倍体积的浓氨水，于40℃水浴、120rpm/min摇床中摇动2小时，充分水洗抽干备用，得活化的琼脂糖凝胶颗粒A；（2）活化的琼脂糖凝胶颗粒和脱‑2‑O硫酸化肝素衍生物的交联：取以上活化后的琼脂糖凝胶颗粒A，并按每克凝胶溶于1ml pH为6.8‑8，0.2M的磷酸缓冲溶液中，加入30‑50mg的脱‑2‑O硫酸化肝素衍生物，再加入2‑6mg氰基硼氢化钠，在室温条件下剧烈摇动反应2‑5天，过滤，滤液冻干回收，得肝素衍生物凝胶颗粒B；(3) 琼脂糖凝胶颗粒的乙酰化：取以上肝素衍生物凝胶颗粒B，按每克凝胶溶于2 ml 0.2M乙酸钠溶液中，并加入1ml的乙酸酐，在0℃条件下搅动反应60min，而后在室温条件下，再加入1ml乙酸酐搅动反应60min；先用100ml纯净水水洗，再用100ml 0.5M NaCl洗，再充分水洗抽干得到肝素衍生物亲和色谱材料。