[发明专利]一种基于LAMP技术快速检测灰葡萄孢的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测灰葡萄孢的方法，可用于灰霉病的快速诊断及病原的发展动态监测，对灰霉病流行的早期预警及合理用药指导具有重要的现实意义。本发明是以环介导恒温扩增技术(LAMP)为基础建立起来的一种快速简便的灰葡萄孢分子检测技术。该检测方法共分3个主要步骤，(1)分别提取待测样品的基因组DNA；(2)进行LAMP反应；(3)根据反应产物颜色判定是否为灰葡萄孢；如果颜色为天蓝色(有扩增产物)为灰葡萄孢；如果颜色为紫色(无扩增产物)则不是灰葡萄孢。本发明为科学研究和生产实践提供了一种简便、快速、成本低廉的灰葡萄孢检测技术，对增加生态、社会和经济效益都具有现实而深远的意义。

主权项

一种基于LAMP技术快速检测灰葡萄孢的方法，步骤是：(1)运用两对特异性引物对待鉴定真菌的基因组DNA进行LAMP恒温扩增。其中所述的两对特异性引物的碱基序列分别是：外引物对：F3：CTACACAACGACCACAGTB3：CCACCAGGTAGTTTCAATCC内引物对：FIP：GCCCTCCAGATAATCCATCTATGG‑CCCGCGACAATATCATCABIP：CATGCGACCTCCACCACAAA‑TTCTTGCGCTTAGTCCAC(2)对上述LAMP扩增产物观察其颜色变化，并在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果；(3)鉴定是否为灰葡萄孢菌株；如果LAMP扩增产物显示天蓝色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为灰葡萄孢菌株；如果扩增产物为紫色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为非灰葡萄孢菌株。