[发明专利]一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法

摘要

一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，将复原羊乳冷却离心去脂，得到脱脂乳，脱脂乳用等电点沉淀法制备酪蛋白，酪蛋白先用Alcalase进行水解，通过水解条件的优化得到含ACE抑制肽的水解液，并以此为底物，通过中性蛋白酶和胰蛋白酶水解条件的优化，获得具有高ACE抑制活性的小分子肽；本方法制备的ACE抑制肽产品的抑制比例能够达到90%以上，具有ACE抑制肽种类多、片段小，有利于小分子肽的分离纯化，且抑制比例高的特点。

主权项

一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：将复原羊乳冷却到4℃，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；步骤2：将所得脱脂乳在35‑75℃范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0‑1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2‑5.0，使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为‑40℃预冻12h，再转移到冷冻干燥机在‑55℃下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率；步骤3：将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min。步骤4：从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45‑65℃的恒温水浴箱中进行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5‑8.5；按照酶与底物质量比为2‑10:100的比例，加入碱性酶Alcalase，水解1‑3h时；水解过程中，每间隔0.5h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，然后使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性；步骤5：将所得上清液吸取50ml，在35‑55℃的恒温水浴箱中进 行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使该溶液的pH值为7.0‑9.0，分别加入质量比为1:1、1:2、2:1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶与底物质量比为2‑10：100，水解5h；水解过程中，每间隔1h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥，得到ACE抑制肽。