[发明专利]一种白灵菇与杏鲍菇原生质体的融合方法

摘要

本发明提供了一种白灵菇和杏鲍菇原生质体的融合方法，其特征是将白灵菇和杏鲍菇菌丝细胞酶解制备原生质体，以白灵菇原生质体热灭活、以杏鲍菇原生质体紫外灭活作为标记，采用PEG介导的化学融合方法，将白灵菇和杏鲍菇原生质体融合，并通过颉颃实验、菌落表型、菌丝形态、出菇试验，并结合RAPD（随机扩增片段多态性）综合验证融合株。本发明有效把白灵菇和杏鲍菇原生质体融合获得具有菌盖不易碎、子实体单生特性的新菌株，为原生质体融合选育目的菌株提供了一种有效方法。

主权项

一种白灵菇和杏鲍菇原生质体的融合方法，其特征在于将白灵菇和杏鲍菇的菌丝体经酶解制备纯化后的原生质体，以白灵菇原生质体热灭活、以杏鲍菇原生质体紫外灭活作为标记，采用PEG介导的化学融合方法，将白灵菇和杏鲍菇原生质体融合，并通过颉颃实验、菌落表型、菌丝形态、出菇试验，并结合RAPD（随机扩增片段多态性）综合验证得融合株；所述的酶解液是白灵菇菌丝体酶解液：以0.6mol/L MgSO4·7H2O为渗透压稳定剂，配制1ml 1.50%（质量体积比）溶壁酶与1.00%蜗牛酶为混合酶解液；杏鲍菇的菌丝体酶解液：以0.6mol/L 蔗糖为渗透压稳定剂，配制1ml 2.00 % 溶壁酶与1.00% 蜗牛酶为混合酶解液；所述白灵菇与杏鲍菇原生质体融合：分别将纯化后白灵菇与杏鲍菇原生质体悬浮于0.6mol/L 蔗糖渗透压稳定剂中，调节浓度至105个/ml，按照原生质体悬液体积比1:1混合，3000r/min离心10min弃上清，0.6mol/L 蔗糖渗透压稳定剂重悬沉淀后逐滴加入等体积30%（质量体积比）PEG6000与50 mmol/L Ca2+混合溶液，28℃水浴融合30min。