[发明专利]一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于纳米功能材料、环境检测、免疫分析及生物传感技术领域，提供了一种双通道环境雌激素电化学免疫传感器的制备方法及应用。采用吸附金属离子的氨基化介孔四氧化三铁标记的电化学免疫传感器，实现了对两种环境雌激素的同时检测，并具有较高的灵敏度，有效克服了目前环境雌激素检测方法的不足，对环境检测具有重要的科学意义和应用价值。

主权项

一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）氨基化介孔四氧化三铁（AFMFe3O4）的制备1 g FeCl3·6H2O溶解于15~18 mL乙二醇，与3 g NaAc和10 mL乙二胺混合均匀，强烈搅拌20~30 min，装入聚四氟乙烯的反应釜中，于180~200 ℃加热8~ 9 h，取出、冷却至室温，得到黑色固体，用超纯水洗涤至中性，制得AFMFe3O4；（2）吸附金属离子的氨基化介孔四氧化三铁（M2+‑AFMFe3O4）的制备分别量取80~100 mL、浓度为80~120 mg/L的Pb2+溶液和80~120 mg/L的Cd2+溶液置于锥形瓶中，分别加入 8~10 mg的氨基化介孔四氧化三铁，振荡1~3 h，使Pb2+ 和Cd2+被氨基化介孔四氧化三铁充分吸附，烘干，制得M2+‑AFMFe3O4，即Pb2+‑AFMFe3O4和Cd2+‑AFMFe3O4，备用；（3）Pb2+‑AFMFe3O4和Cd2+‑AFMFe3O4标记的抗体孵化物的制备1）将0.5 mL、 2~5mg/L的Pb2+‑AFMFe3O4和0.5 mL、2.5%的戊二醛混合，振荡1h，离心，倾倒上层溶液，加入0.4~0.6 mL 、pH 7.0~7.8的PBS溶液，超声使其分散均匀；加入3~5 μL一种环境雌激素抗体（Ab1），振荡10~12 h后离心，用pH 7.0~7.8的PBS溶液定容至1mL，制得Pb2+金属离子标记的抗体孵化物（Pb2+‑AFMFe3O4/Ab1），置于4℃冰箱中备用；2）将0.5 mL、2~5 mg/L的Cd2+‑AFMFe3O4和0.5 mL、2.5%的戊二醛混合，振荡1h，离心，倾倒上层溶液，加入0.4~0.6 mL 、pH7.0~7.8的PBS溶液，超声使其分散均匀；加入3~5μL另一种环境雌激素抗体（Ab2），振荡10~12 h后离心，用pH 7.0~7.8的PBS溶液定容至1mL，制得另一种金属离子标记的抗体孵化物（Cd2+‑AFMFe3O4/Ab2），置于4℃冰箱中备用；（4）一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法1）将3~5μL、2 mg/mL超声处理分散均匀的石墨烯，滴涂在玻碳工作电极表面，自然晾干；2）分别将3~5 μL的两种环境雌激素标准溶液滴涂在1）中得到的工作电极表面， 4℃冰箱中干燥；3）滴涂5~7μL、100µg·mL‑1 的牛血清白蛋白于2）中得到的工作电极表面，置于4℃冰箱中直至干燥，超纯水清洗后，置于4 ℃冰箱中晾干；4）分别取3~5 μL 1中（3）所制备的两种金属离子标记的抗体孵化物Pb2+‑AFMFe3O4/Ab1 和Cd2+‑AFMFe3O4/Ab2滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种双通道环境雌激素免疫传感器。