[发明专利]筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法

摘要

本发明涉及筛选和固定高效石油烃降解菌群应用于海洋石油污染环境修复的方法，从石油污染海区沉积物中富集、驯化、分离出若干石油烃降解菌，选择生长活性强、菌落形态和细胞形态各异的n(n≥3)株菌，测定单菌株石油烃降解率，对其进行16SrDNA分子鉴定。将n株石油烃降解菌混合培养，并从n株菌中随机选出（n-1）株，组合成组不同搭配混合培养，确定石油烃降解菌最优组合，将最优组合的石油烃降解菌群制成固定化菌球保存，以备石油污染后修复海洋环境之用；其为科学合理、简便可行、符合优化组合原则的高效石油烃降解菌群筛选方法，并将高效石油烃降解菌群固定化包埋成球状，缓冲石油污染的冲击，提高石油污染的生物降解效率。

主权项

1.筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法，其特征在于：其步骤如下：第一步：选取石油污染海区采集沉积物样品5g；第二步：将样品加入含有1%柴油的液体无机盐培养基中；无机盐培养基成分为NaCl：22.0g，MgSO₄·7H₂O：2.0g，NH₄NO₃：1.0g，KCl：0.5g，KH₂PO₄：1.0g，Na₂HP0₄：3.0g，CaCl₂：0.1g，FeCl₃：0.005g，MnSO₄：0.002g，ZnCl₂:0.002g，蒸馏水1000mL；第三步：采用含有1%柴油的固体无机盐培养基对第二步的石油烃降解菌进行涂布分离、纯化，并在4℃保种；所述固体无机盐培养为第二步中的液体无机盐培养基加入琼脂15g；第四步：从第三步保种的石油烃降解菌中选取n株菌落形态和细胞形态各异的菌，测定单菌株的石油烃降解率，采用PCR方法扩增16S rDNA进行分子鉴定；第五步：将n株菌混合培养，同时从n株菌中随机选出（n-1）株组合成组组合不同的搭配混合培养，检测n组组合的石油烃降解率，确定石油烃降解菌群组合方案；第六步：将第五步选定的石油烃降解菌群组合固定化，所述固定化选用海藻酸钠为固定化载体；石油烃降解菌群培养液与固定化载体的比例为1:2混合，用无菌注射器抽取含有石油烃降解菌群和海藻酸钠的混合液滴落至CaCl₂溶液中，静置30min，制成直径1~2 cm可沉降的固定化菌球，并4℃保存在无菌海水中。